小鼠胸腺增齡相關新分子IH1的功能研究—參與NF-κB細胞信號轉(zhuǎn)導.pdf

1、IH1是本課題組在小鼠胸腺中發(fā)現(xiàn)的新分子，它隨胸腺增齡表達降低，生物信息學和初步實驗研究顯示，它在雄激素受體、NF-kB等信號通路當中可以發(fā)揮一定作用。NF-κB介導的信號轉(zhuǎn)導是最重要的細胞信號轉(zhuǎn)導通路之一，它在細胞增殖和凋亡、免疫應答、腫瘤發(fā)生、心血管疾病和神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中均起著重要作用。而在某些疾病如癌癥、風濕性疾病、慢性炎癥、哮喘、神經(jīng)退行性疾病和心臟病中，NF-κB信號通路處于持續(xù)活化的狀態(tài)。我們的研究旨在探索IH1與NF-κB細

2、胞信號轉(zhuǎn)導的關系及其可能機制，具體工作如下： 以EIA細胞為模型，對IH1基因進行過表達和RNA干擾，用IL-1β刺激細胞，在不同時間點觀察NF-κB活化以及信號分子Ir-Ba蛋白水平及磷酸化水平的變化。結(jié)果顯示，無論對IH1進行過表達或干擾，都可以增強NF-κB的活化，增加IκBa分子的磷酸化。 為闡明其機制，我們首先對IH1蛋白的結(jié)構(gòu)進行了分析和預測，該分子N端含一個RWD結(jié)構(gòu)域，C端則可能大部分處于未折疊狀態(tài)，而很

3、多這種未折疊蛋白在信號轉(zhuǎn)導或蛋白質(zhì)相互作用中發(fā)揮了重要作用，這提示其功能可能在于與其它分子相互作用。已知RWD結(jié)構(gòu)域與泛素類結(jié)合酶E2在結(jié)構(gòu)上同源，并且一個含該結(jié)構(gòu)域的分子可以與Ubc9結(jié)合，RWD結(jié)構(gòu)域發(fā)揮了不可替代的作用；另外，人類IH1同源基因編碼的蛋白可以和Drg1或Drg2分子相互作用。因此，我們構(gòu)建了Ubc9、Ube12、Ubc13、Drg1和Drg2幾個分子的真核表達載體，用激光掃描共聚焦顯微鏡對細胞內(nèi)IH1與上述幾個分子

4、的共定位進行研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，IH1分子主要分布于胞漿中，能與幾個分子共同定位；隨后用免疫共沉淀技術研究了它們之間的相互作用，發(fā)現(xiàn)IH1可以與Drg1和Drg2發(fā)生相互作用，而未能觀察到IH1與其它分子的相互作用。 綜上所述，我們認為IH1分子參與了NF-κB細胞信號轉(zhuǎn)導，但其機制仍需進一步研究。另一方面，它還可能通過與Drg1或Drg2分子相互作用，在細胞生長和個體發(fā)育的過程中起到一定作用，由此可見，IH1的表達下降可能影響到胸