小鼠胸腺增齡相關新分子IH1的功能研究——參與NF-κB細胞信號轉導.pdf

1、胸腺增齡性退化與萎縮是機體老化過程中最重要的免疫系統(tǒng)表現(xiàn)之一，是決定和制約免疫系統(tǒng)老化的關鍵環(huán)節(jié)。然而，有關胸腺萎縮的調(diào)控機制尚未完全明了。近年研究表明，胸腺萎縮過程伴隨著基因表達的改變，基因表型不同的個體其胸腺萎縮的速度和程度存在明顯的差異。因此，胸腺萎縮是一個受遺傳基因調(diào)控的過程。本課題組在前期研究中，利用差異顯示技術，獲得了4條在老齡鼠和幼齡鼠差異表達的基因，并初步探索了其中一條基因IH1的作用分子。經(jīng)酵母雙雜交、免疫共沉淀和PU

2、LL-DOWN等實驗，結果提示，IH1分子可能是個信號分子，參與細胞信號轉導。經(jīng)NF-κB介導的信號轉導是最重要的細胞信號轉導通路之一，它在細胞增殖和凋亡、免疫應答、腫瘤發(fā)生、心血管疾病和神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中均起著重要作用。本研究旨在探索IH1與NF-κB細胞信號轉導的關系，并開展了下述工作： 一是構建了IH1原核表達載體，表達并純化了IH1蛋白，制備了抗IH1單克隆抗體；二是構建了IH1真核表達載體，轉染了EL4細胞，使之過表達IH

3、1分子；三是設計合成了IH1siRNA，并對EL4細胞進行了RNA干擾實驗。本研究發(fā)現(xiàn)，IH1過表達能顯著提高IL-1β刺激所引起的NF-κB活化，而IH1基因表達的沉默則顯著降低IL-1β刺激所引起的NF-κB活化。同時，我們用激光共聚焦顯微技術對細胞內(nèi)IH1分子的分布和IH1與RACK1、UbB及NEDD8分子的共定位進行研究，發(fā)現(xiàn)IH1分子主要分布于胞漿中，能與RACK1、UbB及NEDD8分子共同定位。 綜上，我們認為I