人纖維蛋白凝膠及其復(fù)合支架的制備與性能.pdf

1、本文構(gòu)建纖維蛋白凝膠和聚乳酸(PLLA)多孔支架或聚(乳酸-乙醇酸)(PLGA)微載體的復(fù)合支架.采用冷凍一凍干的方法從人血漿中提取了纖維蛋白原,在凝血酶的作用下形成纖維蛋白凝膠.采用熱致相分離的方法制備了多孔的PLLA支架.采用乳液揮發(fā)的方法制備了PLGA微球,并用纖維蛋白原對(duì)微球進(jìn)行表面修飾.將纖維蛋白凝膠和PLLA多孔支架、PLGA微載體復(fù)合,分別制備了纖維蛋白凝膠填充的PLLA多孔支架和纖維蛋白凝膠與PLGA微載體的復(fù)合支架.

2、 采用冷凍-凍干的方法從人血漿中提取了纖維蛋白原.將等體積的纖維蛋白原溶液與凝血酶溶液混合,制備了纖維蛋白凝膠.采用紫外光譜跟蹤了凝膠的形成過程,發(fā)現(xiàn)凝血酶濃度、反應(yīng)溫度對(duì)凝膠時(shí)間有決定性影響,而纖維蛋白原濃度對(duì)凝膠時(shí)間的影響較小.經(jīng)二氧化碳臨界點(diǎn)干燥后,采用掃描電鏡觀察了不同條件下形成的纖維蛋白凝膠的微觀結(jié)構(gòu).熱穩(wěn)定分析顯示纖維蛋白原形成凝膠后,熱分解溫度提高到288℃,比纖維蛋白原的熱分解溫度提高了30℃左右.在三蒸水中平衡1

3、1小時(shí)后,纖維蛋白凝膠的吸水率從最初的50倍下降到30～40倍.通過紫外光譜跟蹤檢測(cè),測(cè)定了纖維蛋白凝膠在不同溶液中的失重.體外細(xì)胞培養(yǎng)表明,成纖維細(xì)胞可以在凝膠中很好地鋪展和增值. 纖維蛋白凝膠的長(zhǎng)期穩(wěn)定性,對(duì)所修復(fù)組織的重建和再生至關(guān)重要.為了減緩纖維蛋白凝膠的降解和流失,我們進(jìn)一步構(gòu)建了纖維蛋白凝膠填充的PLLA多孔支架的復(fù)臺(tái)支架.首先利用熱致相分離的力法制備了PLLA多孔支架,將纖維蛋白凝膠填充到PLLA支架中,制備了纖

4、維蛋白凝膠填充的PLLA復(fù)合支架.測(cè)定了不同填充條件形成復(fù)合支架的填充率和凝膠釋放.分別測(cè)定了PLLA支架和填充的復(fù)合支架的力學(xué)性能,發(fā)現(xiàn)復(fù)合支架比PLLA支架具有更好的力學(xué)性能.體外軟骨細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)表明,與未填充的PLLA多孔支架相比較,纖維蛋白凝膠填充的PLLA支架能有效的負(fù)載細(xì)胞,同時(shí)維持細(xì)胞的球狀形態(tài),有效地促進(jìn)細(xì)胞的生長(zhǎng)和活性物質(zhì)的分泌. 采用乳化溶劑揮發(fā)法制備了PLGA微球.采用氨解和接枝技術(shù)相結(jié)合的方法,在PLGA

5、微球表面固定了纖維蛋白原分子,以提高PLGA微球的細(xì)胞相容性.氨解過程中,微球重量隨氨解時(shí)間線性下降,而微球表面的自由氨基隨氨解時(shí)間的延長(zhǎng),先增加后恒定在一穩(wěn)定值.采用戊二醛為偶聯(lián)劑,將纖維蛋白原接枝在PLGA微球表面.纖維蛋白原的固定量隨自由氨基含量的增加而增大.將纖維蛋白原與PLGA微載體均勻混合,在凝血酶的作用下形成纖維蛋白凝膠/PLGA微載體復(fù)合支架.通過激光共聚焦顯微鏡原位觀測(cè)了復(fù)合支架的結(jié)構(gòu),并進(jìn)一步利用掃描電鏡觀察了凍干處