天然黃酮類CFTR氯離子通道激活劑的篩選及分子藥理學研究.pdf

1、囊性纖維化跨膜轉導調節(jié)因子(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator，CFTR)蛋白是一種氯離子通道，屬于ATP結合蛋白(ATP binding cassette，ABC)大家族的成員。CFTR主要功能是進行Cl<'->的跨上皮運輸，同時也能調節(jié)細胞膜上其它離子通道的功能。由CFTR基因突變導致在白種人中廣泛存在的致死性常染色體隱性遺傳病——囊性纖維化(CF)。到目前為止發(fā)現(xiàn)

2、并確定了1，300種以上的CFTR突變。其中66％以上是由于編碼CFTR蛋白質第508位氨基酸的密碼子缺失引起的(△F508-CFTR)。這種突變由于蛋白發(fā)生錯誤折疊或與分子伴侶相互作用的障礙，使得△F508-CFTR滯留在內質網而無法轉運到細胞質膜上。而且即使△F508-CFTR定位到頂膜上，還需要CFTR通道激活劑的作用才能恢復氯離子通道的功能。近年來，從組合化合物庫中篩選到幾種能夠促進△F508-CFTR通道開放的激活劑，它們親和

3、力低而且安全性很受質疑，因此如何尋找到有效且副作用小的治療藥物成為了近幾年研究CFTR的重點。 我們利用含△F508-CFTR(或野生型CFTR)的表達質粒與一種對Ⅰ<'->高度敏感的熒光綠蛋白的突變體YFP的表達質粒共轉染Fisher大鼠甲狀腺上皮細胞(FRT)，得到穩(wěn)定表達該兩種蛋白的細胞系(FRT/△F508-hCFTR/YFP-H148Q/1152L和FRT/wt-hCFTR/YFP-H148Q)。以此為測定模型對黃芩素

4、、杜鵑素等15種黃酮類中藥單體化合物進行激活作用篩選。結果發(fā)現(xiàn)2個單體分子(黃芩素和杜鵑素)具有較強的△F508-CFTR和wt-CFTRCl<'->通道激活作用，2個有弱的激活作用(水飛薊賓和石吊蘭素)。進一步對這4種化合物進行詳細的CFTR分子藥理學分析，包括劑量-效應分析、可逆性分析及時間動力學分析等。結果發(fā)現(xiàn)它們對△F508-CFTR和wt-CFTR的激活作用均呈劑量依賴性；在10分鐘內激活效率能達到最大激活作用的一半；激活作用