CFTR和Ca2+激活氯離子通道在HT-29細(xì)胞增殖和遷移中作用的研究.pdf

1、遼寧師范大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要腫瘤嚴(yán)重威脅人類的健康，世界范圍內(nèi)每年腫瘤的新增病例高達(dá)1410萬(wàn)人，患者大多數(shù)因腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移而死亡。腫瘤細(xì)胞增殖和遷移是腫瘤進(jìn)展的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移是多種因素共同參與的復(fù)雜過(guò)程。近年來(lái)，有研究表明囊性纖維化跨膜傳導(dǎo)調(diào)節(jié)因子(cysticfibrosistransmembraneconduchanceregulator，CFTR)和I鈣激活氯離子通道(Ca2activatedchloridec

2、hannel，CaCC)的表達(dá)和功能與多種腫瘤的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，但是具體作用機(jī)制尚不十分清楚。CFTR是cAMP依賴的氯離子通道，在氯離子跨上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中發(fā)揮重要作用。CaCC是一種受細(xì)胞內(nèi)Ca2調(diào)節(jié)的氯離子通道，廣泛存在于上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞等，參與多種生理過(guò)程。本文以表達(dá)內(nèi)源CFTR和CaCC氯離子通道的結(jié)腸癌細(xì)胞系IIT29為研究對(duì)象，利用選擇性抑制劑GIyH101(抑制CFTR氯離子通道活性)和CaCCiI

3、IlIA01(抑制CaCC氯離子通道活性)系統(tǒng)分析上述兩種氯離子通道在HT29細(xì)胞增殖和遷移中的作用及相關(guān)機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：(1)MTT法結(jié)果顯示GIyH101和CaCC訕A01能夠以劑量和時(shí)間依賴的方式抑制HT29細(xì)胞的增殖，IC50值分別約為9114013Ⅲvi和32884O081aM：GIyH101和CaCCilIhA01對(duì)HT29細(xì)胞增殖的抑制作用具有加和效應(yīng)。(2)以H染色，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果表明GtyH101和CaCCiIIl

4、IA01能夠?qū)T29細(xì)胞周期阻滯在S期；免疫印跡研究結(jié)果顯示GlyH101和CaCCmhA01能夠使HT29細(xì)胞周期相關(guān)蛋白CDK4、CDK6、CyclinDl和CyclinE的表達(dá)下調(diào)，且兩種化合物對(duì)上述周期蛋白表達(dá)的抑制表現(xiàn)出相加效應(yīng)。(3)Hochst33342染色結(jié)果表明，GIyH101和CaCCIiIhA01能夠引起HT29細(xì)胞內(nèi)DNA的斷裂，使得細(xì)胞核皺縮，產(chǎn)生凋亡小體；AnnexinVFITC／PI雙染法結(jié)果顯示GlyH

5、101和CaCCilIllA01能夠誘導(dǎo)HT29細(xì)胞凋亡；免疫印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示GtyH101和CaCCinhA01能夠使HT29細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl一2的表達(dá)量下調(diào)，Bax、Caspase8、CleavedCaspase3和PARP的表達(dá)量上調(diào)，且兩種化合物對(duì)上述凋亡蛋白表達(dá)的抑制表現(xiàn)出相加效應(yīng)。(4)劃痕實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果初步顯示GtyH101和CaCCinhA01對(duì)HT29細(xì)胞的遷移沒(méi)有明顯影響。綜上，本研究發(fā)現(xiàn)了CFTR和CaCC氯離