活性引導(dǎo)的兒茶素類CFTR抑制劑發(fā)現(xiàn)及分子藥理學(xué)研究.pdf

1、分類號：密級：學(xué)校代碼：10165學(xué)號：201111203遣掌師筢大學(xué)碩士學(xué)位論文⑨活性引導(dǎo)的兒茶素類CFTR抑制劑發(fā)現(xiàn)及分子藥理學(xué)研究作者姓名：學(xué)科、專業(yè)：研究方向：導(dǎo)師姓名：陳磊細胞生物學(xué)通道病化學(xué)生物學(xué)楊紅教授2014年05月遼寧師范大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要腸道內(nèi)適量的液體對消化和腸內(nèi)容物的清理是至關(guān)重要的，液體由血液中輸送至腸腔內(nèi)是被動運輸過程，主要是以Cl‘為主的陰離子驅(qū)動完成的。囊性纖維化跨膜電導(dǎo)調(diào)節(jié)因子(CFTR)是ABC蛋白

2、家族成員，其主要功能是為氯離子的轉(zhuǎn)運提供選擇性通道?；魜y弧菌和致病性大腸桿菌產(chǎn)生的外毒素能夠提高細胞內(nèi)cA_～IP水平來激活CFTR氯離子通道，誘導(dǎo)液體分泌過度引發(fā)分泌性腹瀉。因此，抑制CFⅡo氯離子通道開放是避免分泌過度的有效方法，CFTR抑制劑是治療分泌性腹瀉的潛在藥物。許多傳統(tǒng)中藥如狹葉紅景天(Rhodiolakirilowii(Regel)Maxim)，常常用來治療分泌性腹瀉，然而它們治療分泌性腹瀉的分子機制目前并不明確。系統(tǒng)的

3、研究狹葉紅景天中藥，將其活性成分與藥物靶標(biāo)CFTR之間的作用進行比對，明確分子藥理學(xué)機制實現(xiàn)中藥現(xiàn)代化。本研究通過活性引導(dǎo)的方法，從狹葉紅景天中篩選CFTR抑制劑。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：(1)通過細胞熒光測定確定狹葉紅景天中具有CFTR抑制活性成分，運用活性引導(dǎo)的分離方法，從中分離得到目標(biāo)化合物，通過質(zhì)譜學(xué)分析及標(biāo)準(zhǔn)品比對，確定活性化合物為EGCG。(2)應(yīng)用細胞熒光測定方法進一步研究兒茶素類似物C、EC、ECG、EGC，從中發(fā)現(xiàn)ECG同樣具

4、有CFTR抑制活性。(3)FRT細胞熒光測定顯示EGCG和ECG對CFTR氯離子通道的抑制作用具有劑量依賴關(guān)系，EGCG的半抑制濃度IC50是100laM，ECG的IC50為200rtM，二者在高濃度時能100％抑制CFTR通道開放。并且不破壞細胞完整，對細胞無毒副作用。(4)離體組織實驗表明EGCG和ECG能影響大鼠結(jié)腸粘膜短路電流，EGCG和ECG能夠抑制結(jié)腸粘膜上的CFTR的氯離子轉(zhuǎn)運。(5)體內(nèi)活性實驗顯示，在霍亂毒素引起的小鼠