活動性結(jié)核病血清標(biāo)志物的鑒定及診斷模型的建立.pdf

1、目的：應(yīng)用蛋白質(zhì)譜技術(shù)研究活動性肺結(jié)核病患者的血清診斷標(biāo)志物，建立診斷模型早期診斷活動性肺結(jié)核；了解潛在標(biāo)志物的特性及其在肺外結(jié)核病血清中的表達(dá)情況。
　　 方法：應(yīng)用表面加強(qiáng)激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)(SELDI/TOF-MS)和蛋白芯片技術(shù)檢測下列346例人血清：129例活動性肺結(jié)核患者、69例其他呼吸疾病患者、57例結(jié)核性胸膜炎患者、4例非結(jié)核性胸膜炎患者、19例結(jié)核腦膜炎患者、2例非結(jié)核腦膜炎患者和66例正常人血清；應(yīng)

2、用Ciphergen蛋白芯片3.1.1軟件比較、分析血清蛋白峰，篩選疾病相關(guān)生物標(biāo)志物；應(yīng)用Biomarker Pattern5.0軟件建立活動性肺結(jié)核的診斷模型。通過反相高效液相色譜(RP-HPLC)分離純化潛在的生物標(biāo)志物蛋白，應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸附電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)(MALDI-TOF-MS)分析分離所得的蛋白組分，跟蹤目標(biāo)蛋白，目標(biāo)蛋白的酶解產(chǎn)物進(jìn)一步用線性液質(zhì)聯(lián)用離子肼串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)(LC-MS/MS)進(jìn)行分析，以鑒定潛在診斷

3、標(biāo)志物蛋白的性質(zhì)，并SELDI/TOF-MS和蛋白芯片技術(shù)進(jìn)一步分析該診斷標(biāo)志物在肺外結(jié)核病的表達(dá)量。
　　 結(jié)果：(1)129例活動性肺結(jié)核血清和135例對照血清蛋白指紋圖譜比較，有50個差異蛋白峰(p<0.01).以69例其他呼吸疾病血清和66例健康人血清為對照，選擇5個蛋白峰(4360、3311、8160、5723、15173m/z)建立診斷模型1，該模型診斷活動性肺結(jié)核的靈敏度為82.95％，特異性為89.63％，準(zhǔn)確率

4、為86.36％。以69例其他呼吸疾病血清為對照，選擇3個蛋白峰(5643、4486、4360m/z)建立診斷模型2，該模型診斷活動性肺結(jié)核的靈敏度為96.9％，特異性為97.8％，準(zhǔn)確率為97.3％。(2)質(zhì)荷比峰為5643m/z的蛋白為相對高豐度差異表達(dá)蛋白，它在62.8％(81/129)的活動性肺結(jié)核患者血清中表達(dá)顯著增高，在71.9％(97/135)的非結(jié)核呼吸疾病患者和健康人血清中表達(dá)顯著降低。因此，選擇5643 m/z蛋白作為

5、潛在的診斷標(biāo)志物，經(jīng)RP-HPLC分離、純化，并利用MALDI-TOF-MS及LC-MS/MS進(jìn)行鑒定，5643 m/z目標(biāo)蛋白質(zhì)是粘蛋白，又稱為α-1-酸性糖蛋白。57例結(jié)核性胸膜炎患者血清和70例對照血清蛋白指紋圖譜比較，有52個差異蛋白峰(p<0.01)。(3)只有47.4％(27/57例)的結(jié)核性胸膜炎患者血清中5643M/Z蛋白表達(dá)增高；4例非結(jié)核性胸膜炎患者血清中5643M/Z蛋白表達(dá)均減少。(4)19例結(jié)核性腦膜炎患者血清

6、和68例對照血清蛋白指紋圖譜比較，有25個差異蛋白峰(p<0.05)。73.7％(14/19例)的結(jié)核性腦膜炎患者血清中5643M/Z蛋白表達(dá)增高；2例原發(fā)性腦膜炎患者血清中5643M/Z蛋白表達(dá)均減少。
　　 結(jié)論：(1)蛋白質(zhì)譜技術(shù)標(biāo)本用量少，可直接快速地檢測血清標(biāo)本，可能成為一種新的結(jié)核病診斷方法，通過建立結(jié)核病質(zhì)譜診斷平臺服務(wù)于臨床。(2)通過蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可有效地篩選、分離、純化、鑒定結(jié)核病特異性標(biāo)志物。(3)結(jié)核特異