耐藥結(jié)核病血清標(biāo)志物的篩選及Rv0350的克隆、表達(dá)與純化.pdf

1、目的：篩選耐藥結(jié)核分枝桿菌血清學(xué)特異分子標(biāo)志物并體外克隆、表達(dá)及純化Rv0350目的蛋白。
　　方法：收集2011年到2015年就診遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院結(jié)核病患者及健康體檢者血清標(biāo)本，與結(jié)核蛋白芯片雜交篩選特異性蛋白；結(jié)合前期試驗(yàn)篩選出的特異性蛋白，組合制作成蛋白小芯片，再收集血清標(biāo)本與小芯片雜交，進(jìn)一步篩選出耐藥結(jié)核病候選標(biāo)志物。設(shè)計(jì)目的基因引物，行PCR擴(kuò)增目的基因，用pET28a與目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒，然后轉(zhuǎn)染至BL21(DE

2、3)感受態(tài)細(xì)胞，IPTG體外誘導(dǎo)目的蛋白，利用鎳親和層析獲取純化的重組蛋白。
　　結(jié)果：篩選出100個(gè)特異性蛋白，第二次雜交篩選出了8個(gè)與耐藥相關(guān)的抗原，分別為Rv0350、Rv0363c、Rv2396、Rv1100、Rv3509c、Rv3653、Rv0865和Rv2031c，其組合診斷耐藥結(jié)核病的特異度、靈敏度分別為80.4％、80%。我們已經(jīng)申請一項(xiàng)發(fā)明專利（申請?zhí)朇N201610089177.2）。體外成功克隆、表達(dá)和純化R