新型血清肝臟腫瘤標(biāo)志物研究及肝癌診斷模型建立.pdf

1、目的:
　　肝癌是發(fā)病率和致死率都很高的消化道惡性腫瘤，但目前該病的檢測(cè)標(biāo)志物尚無法滿足臨床需求。本課題擬評(píng)價(jià)血清學(xué)標(biāo)志物在肝癌預(yù)警、早期診斷及預(yù)后評(píng)估中的價(jià)值，采用血清學(xué)標(biāo)志物和蛋白指紋圖譜建立肝癌早期診斷和鑒別診斷數(shù)學(xué)模型，并鑒定新發(fā)現(xiàn)的肝癌多肽標(biāo)志物。
　　方法:
　　第一部分:基于血清標(biāo)志物的肝癌診斷模型建立及標(biāo)志物診斷價(jià)值評(píng)價(jià)。(1)采用回顧性隊(duì)列研究方法對(duì)109例肝硬化(LC)患者進(jìn)行24個(gè)月的隨訪，分析血

2、清學(xué)標(biāo)志物水平與肝細(xì)胞癌(HCC)發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)系。(2)檢測(cè)142例HCC，93例亞臨床肝癌(SCHCC)，182例肝硬化(LC)患者血清學(xué)標(biāo)志物水平，分別建立多層感知機(jī)(MLP)，徑向基函數(shù)(RBF)和判別分析(DA)早期HCC診斷模型，通過聯(lián)合多項(xiàng)血清學(xué)標(biāo)志物實(shí)現(xiàn)HCC早期診斷。(3)采用生存分析方法對(duì)36例HCC患者術(shù)后隨訪24個(gè)月，分析血清學(xué)標(biāo)志物水平與HCC術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系。
　　第二部分:MALDI-TOF MS

3、聯(lián)合MB-WCX磁珠建立肝臟惡性腫瘤診斷模型及標(biāo)志物的鑒定。
　　(1)收集43例肝臟惡性腫瘤和52例肝臟良性腫瘤患者血清，采用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS)結(jié)合弱陽(yáng)離子交換磁珠(MB-WCX)技術(shù)檢測(cè)血清中的低分子量多肽，分別建立監(jiān)督神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)(SNN)，遺傳算法(GA)和快速分類器(QC)鑒別診斷模型，并采用50例臨床樣本進(jìn)行盲樣驗(yàn)證和評(píng)價(jià)。(2)采用qTOF Synapt G2-S串聯(lián)質(zhì)譜對(duì)篩選出

4、的差異肽進(jìn)行鑒定，確定具有診斷價(jià)值的差異肽片段來源。
　　結(jié)果:
　　第一部分(1)109例LC患者共有29例發(fā)展為HCC(26.6％)。甲胎蛋白(AFP)、甲胎蛋白異質(zhì)體L3(AFP-L3)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)三項(xiàng)指標(biāo)在發(fā)生HCC組中濃度顯著高于未發(fā)生HCC組(t值分別為-2.299，-2.384，-2.847，p值均＜0.05);AFP、AFP-L3陽(yáng)性為發(fā)展為HCC的潛在危險(xiǎn)因素(相對(duì)危險(xiǎn)度(RR)分別為2.4

5、1、2.26);高爾基體蛋白73(GP73)血清水平在發(fā)展為HCC后顯著下降(t=2.212;p=0.041)。(2)三類肝癌早期診斷模型對(duì)HCC訓(xùn)練和驗(yàn)證樣本分類正確率分別如下:MLP模型為66.7％和63.6％，RBF模型為62.1％和61.4％，DA模型為61.6％和60.7％。(3)單因素分析發(fā)現(xiàn)，僅有術(shù)前GP73濃度對(duì)患者術(shù)后復(fù)發(fā)具有預(yù)測(cè)價(jià)值(x2=4.695，P=0.03)，COX多因素分析發(fā)現(xiàn)AFP-L3、凝血酶原時(shí)間(P

6、t(s))、凝血酶原活動(dòng)度(Pt(a))是患者術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子(風(fēng)險(xiǎn)比(HR)分別為1.003，3.465，1.137，p值均＜0.05)。
　　第二部分(1)通過ClinPro Tools分析，共發(fā)現(xiàn)27個(gè)血清多肽峰在良惡性肝腫瘤患者血清中有差異表達(dá)， GA，SNN，QC模型的重識(shí)別率分別為100％，89.38％，80.84％，交叉驗(yàn)證率分別為81.67％，81.11％，86.11％，盲樣驗(yàn)證準(zhǔn)確率分別為78％，84％，8

7、4％。(2)分子量為2860.34Da，2881.54Da，3155.67Da的差異肽峰被成功鑒定，它們分別是FIBA、FIBB和ITIH4片段。
　　結(jié)論:
　　我們通過隨訪研究證實(shí)檢測(cè)AFP、AFP-L3、GP73、ALT血清水平可對(duì)HCC發(fā)生進(jìn)行早期預(yù)警，而檢測(cè)GP73、AFP、AFP-L3、Pt(s)、Pt(a)血清水平可對(duì)HCC術(shù)后復(fù)發(fā)進(jìn)行預(yù)測(cè);我們建立了基于血清標(biāo)志物的肝癌早期診斷模型和蛋白指紋圖譜肝癌鑒別模型，