野生型p53基因轉(zhuǎn)染聯(lián)合光動(dòng)力療法對(duì)肺癌治療作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文野生型p53基因轉(zhuǎn)染聯(lián)合光動(dòng)力療法對(duì)肺癌治療作用的實(shí)驗(yàn)研究姓名：孫燕妮申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：呼吸內(nèi)科指導(dǎo)教師：劉忠令200405012001級(jí)博L生學(xué)他論文野生型p53基因轉(zhuǎn)染聯(lián)合光動(dòng)力療法對(duì)肺癌治療作用的實(shí)驗(yàn)研究(中文摘要)肺癌是一種基因病，隨著現(xiàn)代分子腫瘤學(xué)的發(fā)展，肺癌的基因治療成為繼手術(shù)、放、化療后最具前景的治療手段。由于腫瘤發(fā)生的復(fù)雜性及患者的異質(zhì)性，往往要將基因治療與其它療法相結(jié)合才能收到滿意的療效。

2、本課題首次將wtp53基因轉(zhuǎn)染與光動(dòng)力療法聯(lián)合起來用于肺癌的治療，探討兩種療法對(duì)人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549增殖、凋亡及腫瘤血管生成的各自作用及相互影響。具體實(shí)驗(yàn)分體外、體內(nèi)兩部分，共分以下六組：A549細(xì)胞(A)、A549／pCDNA3卜neo細(xì)胞(B)、A549／pCDNA3卜wtp53細(xì)胞(C)、A549細(xì)胞PDT(D)、A549／pCDNA31neo細(xì)胞PDT(E)、A549／pCDNA3卜wtp53細(xì)胞PDT(F)。第一部分體外實(shí)驗(yàn)

3、目的：研究wtp53基因轉(zhuǎn)染聯(lián)合PDT對(duì)體外培養(yǎng)的人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞增殖周期及凋亡的作用，并在此基礎(chǔ)上初步探討其對(duì)腫瘤血管生成的影響。方法：將pCDNA3卜wtp53質(zhì)粒和空載體pCDNA3卜neo質(zhì)粒，通過陽離子脂質(zhì)體Lipofectamin2000分別轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞，以sqRT—PCR和Westernblot分析外源基因的整合與表達(dá)。PDT(HPDlOug／ml、激光劑量lOJ／cm2)后24h進(jìn)入實(shí)驗(yàn)。將六組細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)

4、7天，觀察細(xì)胞生民曲線。流式細(xì)胞術(shù)測定細(xì)胞周期及凋亡率、瓊脂糖電泳觀察DNALadder、TUNEL標(biāo)記法檢測細(xì)胞AI。用sqRT—PCR分析VEGFmRNA表達(dá)，ELISA法測定細(xì)胞培養(yǎng)上清中VEGF蛋白的水平。結(jié)果：細(xì)胞生長曲線顯示A組與B組細(xì)胞均呈對(duì)數(shù)生長，C、D、E紕細(xì)胞生長有所減慢，潛伏期延長，聯(lián)合治療的F組細(xì)胞生氏抑制顯著，7天后細(xì)胞數(shù)儀增加了45104。細(xì)胞周期分析結(jié)果表I朔：C、D、F、f四組均早(；(】／(11期蟲氏停