預防性應用銀杏黃酮、氨磷汀和亮丙瑞林對卵巢功能保護的研究.pdf

1、目的:卵巢惡性生殖細胞腫瘤(malignant ovarian germ cell tumor，MOGCT)是來源于胚胎性腺的惡性腫瘤，好發(fā)于兒童及青少年，患者往往有生育要求。該腫瘤手術(shù)聯(lián)合術(shù)后化療效果顯著，但化療后卵巢功能受損，嚴重影響患者的生存質(zhì)量及生育功能。國內(nèi)外學者均致力于研究對化療所致卵巢功能損傷的保護方法，多項實驗研究證實GnRH類似物對卵巢功能的保護作用效果確切，銀杏黃酮抗氧化、抑制凋亡及對化療藥物耐藥的逆轉(zhuǎn)等作用也在多個

2、實驗中得到了驗證，而氨磷汀作為細胞保護劑，其在放化療過程中對于多個器官均顯示保護作用，但其對卵巢的保護作用目前未見報道。
　　 MOGCT的常用化療方案為BEP、EP、VIP方案，其中主要損傷卵巢功能的藥物為順鉑。
　　 本次實驗使用大鼠作為卵巢功能損傷的模型，探討銀杏黃酮、氨磷汀及亮丙瑞林對化療所致卵巢功能損傷的保護作用。上述三種藥物在發(fā)揮卵巢功能保護作用的同時，是否影響順鉑的抗腫瘤作用，也是影響其臨床應用的一個關(guān)鍵，

3、本次實驗使用惡性畸胎瘤細胞PA-1作為惡性生殖細胞腫瘤的代表，探討三種藥物對順鉑的抗腫瘤作用的影響。
　　 方法:
　　 1、順鉑所致卵巢功能損傷的大鼠模型的建立:通過大鼠E2及FSH水平的測定及卵巢卵泡計數(shù)確定造模的劑量和時間。
　　 2、銀杏黃酮、氨磷汀及亮丙瑞林對順鉑所致大鼠卵巢功能損傷的保護作用的研究:通過卵泡計數(shù)、稱量卵巢重量、TUNEL法計算凋亡指數(shù)，Western-blot法檢測胞漿Cyt-c及Ap

4、af-1蛋白含量及實時定量PCR法檢測胞漿Cyt-c及Apaf-1 mRNA表達水平。
　　 3、銀杏黃酮、氨磷汀及亮丙瑞林對順鉑抑制PA-1細胞作用的影響的研究:CCK-8法檢測細胞增殖抑制率，Western-blot法檢測胞漿Cyt-c及Apaf-1蛋白含量，使用實時定量PCR法檢測胞漿Cyt-c及Apaf-1 mRNA及Apaf-1 mRNA表達水平。
　　 結(jié)果:
　　 1、各組大鼠E2及FSH水平分別為

5、:
　　 A組E273.87±13.95 pg/ml， B組E272.03±6.74 pg/ml， C組E265.17±5.43 pg/ml,D組E243.17±6.78 pg/ml,E組E232.80±2.46 pg/ml,F組E228.60±2.78 pg/ml，G組E222.37±2.91pg/ml，與A組相比，D組、E組、F組及G組E2下降，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）;A組FSH1.07±0.15IU/L，B組FS

6、H1.13±0.15 IU/L，C組FSH1.30±0.26 IU/L，D組FSH1.30±0.26IU/L，E組FSH2.20±0.36 IU/L，F(xiàn)組FSH3.23±0.31 IU/L，G組FSH4.13±0.40IU/L，與A組相比，E組、F組及G組FSH升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。綜合卵泡計數(shù)情況，選取E組給藥方案作為造模方案
　　 2、給予銀杏黃酮、氨磷汀及亮丙瑞林后各組大鼠卵泡計數(shù):
　　 生理鹽

7、水組原始卵泡37.9±2.9個，生長卵泡24.3±1.3個，成熟卵泡13.2±1.3個，卵泡總數(shù)為75.4±3.1個。順鉑組原始卵泡35.2±4.0個，生長卵泡8.9±1.3個，成熟卵泡5.5±1.1個，卵泡總數(shù)為49.6±4.5個，各級卵泡及卵泡總數(shù)較生理鹽水組少，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。銀杏黃酮+順鉑組原始卵泡39.2±2.2個，生長卵泡13.6±1.3個，成熟卵泡9.2±1.1個，卵泡總數(shù)為60.5±3.9個，各級卵泡及

8、卵泡總數(shù)較生理鹽水組少，較順鉑組多，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。氨磷汀+順鉑組原始卵泡36.7±2.1個，生長卵泡15.8±2.1個，成熟卵泡11.3±2.0個，卵泡總數(shù)為63.8±5.1個，各級卵泡及卵泡總數(shù)較生理鹽水組少，較順鉑組多，生長卵泡及成熟卵泡數(shù)量較銀杏黃酮+順鉑組多，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，原始卵泡及卵泡總數(shù)與銀杏黃酮+順鉑組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。亮丙瑞林+順鉑組原始卵泡58.4±2.5個

9、，生長卵泡6.4±1.0個，成熟卵泡2.7±2.2個，卵泡總數(shù)為67.7±3.5個，原始卵泡數(shù)量較其他四組多，生長卵泡及成熟卵泡較其他四組少，卵泡總數(shù)較生理鹽水組少，較順鉑組、銀杏黃酮+順鉑組即氨磷汀+順鉑組多，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 3、各組卵巢凋亡指數(shù)的結(jié)果:
　　 生理鹽水組凋亡指數(shù)為3.6±0.7。順鉑組凋亡指數(shù)為65.3±2.9，明顯高于生理鹽水組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。銀杏黃酮+

10、順鉑組凋亡指數(shù)為35.7±2.0，高于生理鹽水組，低于順鉑組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。氨磷汀+順鉑組凋亡指數(shù)為37.4±1.6，高于生理鹽水組，低于順鉑組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），與銀杏黃酮+順鉑組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。亮丙瑞林+順鉑組凋亡指數(shù)為30.5±2.9，高于生理鹽水組，低于順鉑組、銀杏黃酮+順鉑組及氨磷汀+順鉑組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　 4、各組卵巢胞漿Cyt-c

11、及Apaf-1蛋白的含量:
　　 順鉑組較生理鹽水組高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。銀杏黃酮+順鉑組，較生理鹽水組高，較順鉑組低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。氨磷汀+順鉑組含量較生理鹽水組高，較順鉑組低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。與銀杏黃酮+順鉑組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。亮丙瑞林+順鉑組與生理鹽水組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，較順鉑組、銀杏黃酮+順鉑組及氨磷汀+順鉑組低，差異有統(tǒng)計學

12、意義(P＜0.05)。
　　 5、各組卵巢胞漿Cyt-c及Apaf-1 mRNA的含量:
　　 順鉑組表達高于生理鹽水組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。銀杏黃酮+順鉑組表達低于生理鹽水組及順鉑組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。氨磷汀+順鉑組表達低于生理鹽水組、順鉑組及銀杏黃酮+順鉑組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。亮丙瑞林+順鉑組表達與生理鹽水組比較差異無統(tǒng)計學意義，較順鉑組低，較銀杏黃酮+順鉑組及氨磷汀+順

13、鉑組高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　 6、各組PA-1細胞增殖抑制率:
　　 生理鹽水組增殖抑制率為0，順鉑組增殖抑制率為44.7％，銀杏黃酮+順鉑組增殖抑制率為56.3％，高于順鉑組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。氨磷汀+順鉑組增殖抑制率為64.0％，高于順鉑組及銀杏黃酮+順鉑組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。亮丙瑞林+順鉑組增殖抑制率為61.5％，高于順鉑組及銀杏黃酮+順鉑組，低于氨磷汀+順鉑組，

14、差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 7、各組PA-1細胞胞漿Cyt-c蛋白的含量:
　　 順鉑組含量為1.56±0.09，較生理鹽水組高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。銀杏黃酮+順鉑組含量為1.87±0.03，較生理鹽水組高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。與順鉑組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），氨磷汀+順鉑組含量為2.91±0.07，較生理鹽水組、順鉑組及銀杏黃酮+順鉑組高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.

15、05）。亮丙瑞林+順鉑組含量為2.31±0.05，較生理鹽水組、順鉑組及銀杏黃酮+順鉑組高，較氨磷汀+順鉑組低差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 8、各組PA-1細胞胞漿Apaf-1蛋白的含量:
　　 順鉑組含量為1.72±0.09，較生理鹽水組高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。銀杏黃酮+順鉑組含量為2.66±0.10，較生理鹽水組及順鉑組高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。氨磷汀+順鉑組含量為4.35±0.

16、30，較生理鹽水組、順鉑組及銀杏黃酮+順鉑組高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。亮丙瑞林+順鉑組含量為2.46±0.17，較生理鹽水組及順鉑組高，較氨磷汀+順鉑組低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），與銀杏黃酮+順鉑組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　 9、各組PA-1細胞胞漿Cyt-c mRNA的含量:
　　 順鉑組表達為生理鹽水組的2.23±0.45倍，銀杏黃酮+順鉑組表達為生理鹽水組的3.64±0.35

17、倍，氨磷汀+順鉑組表達為生理鹽水組的7.56±0.66倍，亮丙瑞林+順鉑組表達為生理鹽水組的4.22±0.42倍，各組間兩兩比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　 10、各組PA-1細胞胞漿Apaf-1 mRNA的含量:
　　 順鉑組表達為生理鹽水組的1.91±0.23倍，較生理鹽水組高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。銀杏黃酮+順鉑組表達為生理鹽水組的2.72±0.45倍，較生理鹽水組高，差異有統(tǒng)計學意義（P

18、＜0.05），與順鉑組相比差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。氨磷汀+順鉑組表達為生理鹽水組的5.77±0.45倍，較生理鹽水組、順鉑組及銀杏黃酮+順鉑組高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。亮丙瑞林+順鉑組表達為生理鹽水組的3.07±0.34倍，較生理鹽水組及順鉑組高，較氨磷汀組低，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。與銀杏黃酮+順鉑組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1、順鉑對大鼠卵巢功能損傷作

19、用明顯，2mg/(kg·d)腹腔注射7天可獲得滿意的卵巢功能損傷大鼠動物模型。
　　 2、順鉑腹腔注射前給予銀杏黃酮、氨磷汀及亮丙瑞林、對順鉑所致大鼠卵巢功能損傷有一定的保護作用，且亮丙瑞林作用優(yōu)于銀杏黃酮及氨磷汀，銀杏黃酮與氨磷汀的作用相當。
　　 3、順鉑對體外培養(yǎng)的PA-1細胞有明顯抑制作用，給予順鉑前給予銀杏黃酮、氨磷汀及亮丙瑞林，不減弱順鉑對PA-1的抑制作用，反而有加強作用，可上調(diào)Cyt-c和Apaf-1mR