銀杏黃酮苷元制備的研究.pdf

1、銀杏是地球上最古老的稀有植物之一，黃酮類化合物是銀杏葉中的重要活性成分。本論文采用酸、游離酶和固定化酶分別水解銀杏黃酮制備具有更高生物學(xué)活性的銀杏黃酮苷元，并采用大孔吸附樹脂分離富集水解液中銀杏黃酮苷元得到銀杏黃酮苷元粗品。 首先，分別采用鹽酸和β-葡萄糖苷酶水解銀杏葉提取物以制備銀杏黃酮苷元。通過正交實(shí)驗(yàn)得出了酸水解的最佳工藝參數(shù)為溫度70℃，時(shí)間4h，鹽酸濃度4mol/L，甲醇濃度為80％，固液比(mg/mL)2:1，此時(shí)轉(zhuǎn)

2、化率可達(dá)到93.8％，總苷元得率為9.23％；酶水解的最佳工藝參數(shù)為溫度40℃，酶濃度5×10-3mg/mL，即加酶量為8U/mL，pH5.0，水解時(shí)間6h，此條件下轉(zhuǎn)化率可達(dá)到88.2％，總苷元得率為9.08％。由HPLC圖譜比較發(fā)現(xiàn)經(jīng)酸解的產(chǎn)物內(nèi)能檢測(cè)到的基本只有黃酮苷元，而經(jīng)酶解的產(chǎn)物內(nèi)還保留了許多其他成分，有利于保留銀杏葉提取物的綜合生物活性。 其次，選擇采用海藻酸鈣包埋β-葡萄糖苷酶使其固定化。利用固定化β-葡萄糖苷酶

3、將糖苷型黃酮水解為苷元型黃酮，可以降低酶解工藝成本。研究考察了不同反應(yīng)溫度、pH、時(shí)間、酶濃度對(duì)固定化β-葡萄糖苷酶酶解效果的影響，以及固定化β-葡萄糖苷酶的貯藏穩(wěn)定性和操作穩(wěn)定性。其最佳反應(yīng)溫度為40℃、pH為5.0、時(shí)間為7h、固定化酶濃度為0.1g/mL(以海藻酸鈣凝膠珠計(jì)，以游離酶計(jì)為6.5×10-3mg/mL)，即加酶量為9.6IU/mL，此時(shí)苷元型黃酮的轉(zhuǎn)化率可達(dá)86.6％，而且固定化后β-葡萄糖苷酶的貯藏穩(wěn)定性和操作穩(wěn)定性

4、都顯著提高。 最后，進(jìn)行了大孔吸附樹脂分離富集，純化水解液中銀杏黃酮苷元的性能研究。通過靜態(tài)吸附一解吸和吸附動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)，從3種大孔吸附樹脂中篩選出YWD07a樹脂為最適合銀杏黃酮苷元的富集分離的大孔吸附樹脂。YWD07a樹脂吸附分離銀杏黃酮苷元的工藝條件為：吸附液中銀杏黃酮苷元的濃度3.26mg/mL，pH5.0，流速2BV/h，以6BV的70％乙醇洗脫，解吸附效果最佳。得到的銀杏黃酮苷元粗品中銀杏黃酮苷元含量由18.5g/10