鼻咽癌患者γδT細(xì)胞殺瘤活性及Vδ亞型的研究.pdf

1、中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文鼻咽癌患者γδT細(xì)胞殺瘤活性及Vδ亞型的研究姓名：王小路申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：耳鼻咽喉科指導(dǎo)教師：張連山何維2003.4.1!里塑塑堡型查堂墮主堂堡絲蘭!莖蘭塑莖：堅(jiān)：獲得的y6T細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光抗體染色流式細(xì)胞儀純度分析，及亞型進(jìn)行分析，并對(duì)增殖特點(diǎn)進(jìn)行了觀察；采用組織塊培養(yǎng)法對(duì)從實(shí)體瘤中獲得的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行了體外原代培養(yǎng)，同時(shí)進(jìn)行了免疫組織化學(xué)鑒定，裸鼠皮下種植；在不同效靶比條件下，用MTT法測(cè)定了正常人

2、外周血和鼻咽癌患者外周血的Y6T細(xì)胞對(duì)同種異體鼻咽癌細(xì)胞系CNEl，CNE2，和新建傳代培養(yǎng)的鼻咽癌細(xì)胞，及daudi細(xì)胞的細(xì)胞毒活性；通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT—PCR)在轉(zhuǎn)錄水平測(cè)定了體外擴(kuò)增的正常人外周血，鼻咽癌患者外周血v6T細(xì)胞及腫瘤浸潤(rùn)部位75T細(xì)胞的TCRV6主要亞型(V61、V62和V63)表達(dá)。結(jié)果：通過(guò)固相抗體法分離擴(kuò)增得到了來(lái)源于正常人外周血，鼻咽癌患者的外周血的yST細(xì)胞(選擇擴(kuò)增于外周血單個(gè)核細(xì)胞)年H75T

3、IL(選擇擴(kuò)增于腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞)，擴(kuò)增純度在四周內(nèi)最高可達(dá)到97％，細(xì)胞數(shù)量可達(dá)到108。但不同組織來(lái)源的yST細(xì)胞擴(kuò)增到一定純度所需時(shí)間有所差別。其擴(kuò)增純度達(dá)到7070左右的時(shí)間順序?yàn)椋和庵苎獃3T細(xì)胞最快，約14天左右，均達(dá)82％以上；75TIL所需時(shí)間較長(zhǎng)，約30天左右。在yST細(xì)胞擴(kuò)增的同時(shí)，進(jìn)行了原代鼻咽癌細(xì)胞的同步培養(yǎng)，經(jīng)鑒定，體外擴(kuò)增得到的腫瘤細(xì)胞為高純度的鼻咽癌細(xì)胞：通過(guò)y4J】5T細(xì)胞體外細(xì)胞毒活性的進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)擴(kuò)