間接包被ELISA法檢測血清游離β-HCG方法學(xué)研究.pdf

1、目的：
　　 1.建立間接包被ELISA（enzyme linked immunosorbent assy，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）檢測血清游離β-HCG（free-β-huaman chorionic gonadotropin，F(xiàn)-β-HCG）檢測方法。
　　 2.探討降低ELISA試驗(yàn)中非特異反應(yīng)的方法。
　　 3.評(píng)估游離β-HCG檢測在相關(guān)疾病診療中的意義。
　　 方法：
　　 1.間接包被EL

2、ISA法檢測血清游離β-HCG方法學(xué)建立（1）BBC酶標(biāo)反應(yīng)板的制備，（2）抗游離β-HCG單克隆抗體（monoclonal antibody，mAb）的生物素化，（3）辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）過碘酸鈉法標(biāo)記抗游離β-HCG多克隆抗體（polyclonal antibody，pAb），（4）間接包被ELISA法檢測血清游離β-HCG方法學(xué)建立及評(píng)價(jià)。
　　 2.降低ELISA中非特異

3、顯色方法學(xué)探討（1）更換標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，（2）用連接有包被抗體的親和層析柱提純酶標(biāo)抗體，（3）在酶標(biāo)抗體中加入包被抗體的Fc段3.血清游離β-HCG與相關(guān)疾病的臨床研究（1）血清游離β-HCG檢測對(duì)正常妊娠與異位妊娠的診斷意義，（2）血清游離β-HCG檢測在妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞疾病中的臨床意義。
　　 結(jié)果：
　　 1.間接包被ELISA法檢測血清游離β-HCG方法學(xué)建立：通過對(duì)該方法中各種反應(yīng)條件的優(yōu)化，確定了最適工作條件：生物

4、素抗體和酶標(biāo)抗體的最適工作濃度分別為1:1000和1:12000，本檢測方法具有較好的穩(wěn)定性，靈敏度0.1ng/ml，回收率95.92％～102.51％，批內(nèi)差異7.54％～11.12％，批間差異12.51％～18.11％，與FSH、TSH、LH、α-HCG的交叉反應(yīng)率<0.1％，檢測范圍0.1～500ng/ml，與進(jìn)口試劑盒的相關(guān)性尚可（r2=0.7892）。
　　 2.降低ELISA中非特異顯色方法學(xué)探討：結(jié)果顯示，更換標(biāo)準(zhǔn)

5、品稀釋液和用連接有包被抗體的親和層析柱提純酶標(biāo)抗體兩種方式對(duì)本方法不適用，而向酶標(biāo)抗體中加入包被抗體的Fc段在本實(shí)驗(yàn)中效果顯著。
　　 3.血清游離β-HCG與相關(guān)疾病的臨床研究：正常妊娠孕婦血清游離β-HCG水平明顯高于異位妊娠患者（p<0.05），妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞疾病患者血清游離β-HCG水平明顯高于正常妊娠孕婦（p<0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.本文研制的間接包被檢測血清游離β-HCG方法，引入了生物素