以重組NP為抗原GPMV抗體間接ELISA檢測(cè)方法的建立.pdf

1、1997年以來，在我國許多地區(qū)爆發(fā)了由鵝副粘病毒(GooseParamyxovirus，GPMV)引起的鵝的烈性傳染病。該病是以消化道和呼吸道病變?yōu)橹饕卣鳎哂懈叨劝l(fā)病率和死亡率，給養(yǎng)鵝業(yè)帶來了很大的損失。國內(nèi)外學(xué)者先后建立了瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、中和試驗(yàn)、血凝抑制試驗(yàn)等血清學(xué)診斷方法，在一定程度上為防治鵝副粘病毒病發(fā)揮了重要作用，但同時(shí)也存在靈敏度差、操作煩瑣、檢測(cè)所需時(shí)間長等不足，已不適應(yīng)更有效地控制該病的需要。 本論文將鵝副粘病

2、毒NP基因的重組質(zhì)粒pGEX-6P-NP轉(zhuǎn)化到工程菌BL21(DE3)pLysS內(nèi)，重組NP蛋白在大腸桿菌中獲得了表達(dá)，并且進(jìn)行了切膠純化。用表達(dá)的融合蛋白作為包被抗原，以滅活油苗免疫制得的鵝血清做為一抗，HRP標(biāo)記的兔抗鵝血清作為二抗，并確定了ELISA最佳工作條件，即抗原包被濃度為54μg/ml，4℃包被過夜，血清(1∶800)和酶標(biāo)兔抗鵝(1∶1500)分別在37℃1h，底物溶液37℃顯色20min。對(duì)各項(xiàng)條件和參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化，為