小鼠血清中弓形蟲Peroxiredoxin抗原間接ELISA檢測方法的建立及其血清流行病學(xué)應(yīng)用.pdf

1、目的：
　　 建立小鼠血清中弓形蟲Peroxiredoxin抗原的間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測方法。用此法檢測人血清中弓形蟲Peroxiredoxin抗原，進(jìn)行人群弓形蟲病血清流行病學(xué)調(diào)查。
　　 方法：
　　 第一部分：應(yīng)用棋盤滴定方法選擇適宜的被檢血清濃度、抗體濃度及酶標(biāo)二抗?jié)舛?。觀察封閉液對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，并繪制蛋白定量標(biāo)準(zhǔn)曲線。對30份感染弓形蟲小鼠血清及30份正常小鼠血清進(jìn)行間接ELISA檢測

2、，評價(jià)該方法的檢測效果。測定其敏感度、特異性及重復(fù)性。
　　 第二部分：采用整群抽樣的研究方法，在神池縣城和神池農(nóng)村，各抽取一個(gè)居民小組居民作為研究對象。采集1021份空腹靜脈晨血，用間接ELISA法檢測人血清中弓形蟲Peroxiredoxin抗原。
　　 結(jié)果：
　　 被檢血清最適包被濃度為1∶50，大鼠抗弓形蟲血清最佳稀釋度為1∶100(實(shí)際效價(jià)1∶128)，辣根酶標(biāo)記山羊抗大鼠IgG的最適稀釋度為1∶400

3、0。封閉液對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響不大。該方法敏感度高、重復(fù)性好、特異性強(qiáng)，檢測30份弓形蟲感染小鼠血清的檢出率為100％。
　　 不同年齡組人群血清弓形蟲IgG抗體陽性率不同，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2趨勢=4.195，P=0.522)。不同性別人群血清弓形蟲IgG抗體陽性率不同，差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=0.000，P=0.990)。不同文化程度人群血清弓形蟲IgG抗體陽性率不同，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2趨勢=6.322，P=0.097)。

4、不同職業(yè)人群血清弓形蟲IgG抗體陽性率不同，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2趨勢=8.584，P=0.284)。調(diào)查1021人中，未養(yǎng)犬和貓者弓形蟲IgG抗體陽性率低于養(yǎng)犬者和養(yǎng)貓者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=13.157，P=0.004)。有吃生雞蛋習(xí)慣者弓形蟲IgG抗體陽性率高于無吃生雞蛋習(xí)慣者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=8.417，P=0.004,)。經(jīng)常生吃蔬菜和不潔瓜果者弓形蟲IgG抗體陽性率高于偶而有該習(xí)慣者和無此習(xí)慣者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

5、(x2=12.201，P=0.002)。調(diào)查1021人中，加工生肉與熟食所用刀板經(jīng)常不分者血清弓形蟲IgG抗體陽性率高于偶爾不分者和從不混同使用者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=9.767，P=0.008)。經(jīng)常接觸泥土者弓形蟲IgG抗體陽性率高于偶而接觸和從未接觸泥土者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=13.753，P＝0.001)。飯前便后洗手做到每次或經(jīng)常洗者弓形蟲IgG抗體陽性率低于偶爾或從不洗者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2＝43.125，P＜0

6、.001)。特殊人群弓形蟲IgG抗體陽性率分別為：臨床免疫功能低下者為20.00％，獻(xiàn)血員17.85％，屠宰人員和生肉銷售者27.78％，其中屠宰人員和生肉銷售者弓形蟲IgG抗體陽性率最高，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=1.012，P=0.603)。
　　 結(jié)論：
　　 建立了小鼠血清中弓形蟲Prx抗原的間接ELISA法。該方法敏感、特異、穩(wěn)定，可適用于弓形蟲病的診斷及流行病學(xué)調(diào)查。成功應(yīng)用ELISA法檢測人血清中Peroxi