大鼠體內(nèi)游離棉酚含量檢測方法學(xué)研究.pdf

1、目的：建立棉籽仁和大鼠血漿中游離棉酚(FG)含量HPLC檢測方法以及大鼠血漿、肝臟和肌肉組織中游離棉酚含量的HPLC-MS檢測方法。方法：HPLC法測定棉籽仁和大鼠血漿中游離棉酚的含量：采用色譜柱ODS-C18（4.6 mm×200 mm，5 μm），柱溫25 ℃，流動(dòng)相為甲醇-1%磷酸水溶液（85:15，V/V），流速1.0 mL/min，檢測波長235 nm；HPLC-MS法檢測大鼠血漿、肝臟以及肌肉組織中游離棉酚含量：以丙酮作為樣

2、品的提取劑和沉淀劑，經(jīng)過渦旋、離心，取上清液吹干，甲醇溶解再次渦旋、離心，進(jìn)一步除去干擾物質(zhì)，0.45 μm微孔濾膜過濾，進(jìn)樣測定，采用色譜柱Agilent ZORBAX SB-C18（2.1 mm×150 mm，5 μm），柱溫25 ℃，測定血漿所用流動(dòng)相為乙腈-1%甲酸水溶液（80:20，V/V），測定肝臟及肌肉組織所用流動(dòng)相為甲醇-1%甲酸水溶液（85:15，V/V），流速0.2 mL/min，以甘草次酸為內(nèi)標(biāo)，樣品通過電噴霧電離

3、源(ESI)離子化后采用選擇性離子監(jiān)測(SIM)方式測定，棉酚的檢測離子為[M-H]- m/z 517.2，甘草次酸的檢測離子為[M-H]- m/z 469.3。結(jié)果：1. HPLC法檢測棉籽仁中游離棉酚含量：游離棉酚濃度在1.90～35.00 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.999 6，高、中、低三個(gè)濃度的加樣回收率為98.6%～100.4%，12種棉籽仁樣品中游離棉酚的含量為0.60%～1.20%。2. HPLC法檢測大鼠血漿

4、中游離棉酚含量：血漿棉酚在0.33～3.30 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.999 4，檢測限為0.04 μg/mL(S/N=3)，高、中、低三個(gè)濃度的平均加樣回收率為94.7%～97.3%，給藥組大鼠血漿中游離棉酚的含量為0.68～2.14 μg/mL。3. HPLC-MS法測定大鼠血漿、肝臟、肌肉組織中游離棉酚含量：血漿棉酚在0.075～7.500 μg/mL范圍內(nèi)呈良好線性，r=0.998 2，檢測限為5 ng/mL，高、

5、中、低三個(gè)濃度的平均加樣回收率為93.3%～97.2%，給藥大鼠血漿中棉酚的含量為0.28～1.05 μg/mL；肝臟棉酚在0.61～61.58 μg/g范圍內(nèi)呈良好線性，r=0.999 0，檢測限為10 ng/g，高、中、低三個(gè)濃度的平均加樣回收率為92.8%～98.0%，給藥組大鼠肝臟中棉酚的含量為3.09～6.38 μg/mL；肌肉組織棉酚在0.03～4.12 μg/g范圍內(nèi)呈良好線性，r=0.999 2，檢測限為2 ng/g，高