輔助性腺病毒的構(gòu)建及鑒定.pdf_第1頁(yè)
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1、目的為研究第三代復(fù)制依賴性腺病毒載體應(yīng)用于慢性疼痛基因治療的可行性，構(gòu)建第三代腺病毒生產(chǎn)體系中的輔助性腺病毒以及表達(dá)Cre重組酶的真核表達(dá)載體，并對(duì)Cre切除輔助病毒包裝信號(hào)的有效性進(jìn)行分析。方法以重疊延伸PCR及酶切連接的方法將同向的兩個(gè)loxP位點(diǎn)和綠色熒光蛋白表達(dá)盒依次克隆入pShuttle穿梭載體質(zhì)粒，按照AdEasyTM系統(tǒng)的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行輔助病毒的生產(chǎn)和擴(kuò)增。同時(shí)構(gòu)建pcDNA3.1(+)-cre真核表達(dá)載體，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染H

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