sCD80-Linker-sCD40L融合基因腺病毒載體的構(gòu)建及鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:構(gòu)建攜帶sCD80-Linker-sCD40L融合基因的復(fù)制缺陷型腺病毒載體.方法:在GenBank檢索人CD80、CD40L及IL-12b基因編碼序列,確定擴(kuò)增區(qū)域,設(shè)計引物.以Trizol抽提人外周血單個核細(xì)胞總RNA,使用RT-PCR方法獲得IL-12b信號肽、sCD80、sCD40L等基因的編碼序列,并分別克隆入T載體.重疊PCR構(gòu)建sCD80-Linker-sCD40L融合基因,克隆入T載體.使用Stratagene公司

2、AdEasy XL Adenoviral Vector System試劑盒構(gòu)建攜帶sCD80-Linker-sCD40L融合基因的復(fù)制缺陷型腺病毒載體.空斑實(shí)驗(yàn)檢測病毒滴度,Westen blot測定蛋白表達(dá).結(jié)果:經(jīng)測序證實(shí),正確克隆了人IL-12b信號肽、sCD80、sCD40L編碼序列,構(gòu)建了攜帶sCD80-Linker-sCD40L融合基因的T載體,并進(jìn)一步構(gòu)建了攜帶該融合基因的復(fù)制缺陷型腺病毒載體.該實(shí)驗(yàn)病毒滴度為2×10<'

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