建立差異磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)平臺(tái)分析EB病毒瘤蛋白LMP1介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路.pdf

1、 本文介紹了借助磷酸化蛋白質(zhì)體內(nèi)外富集策略，結(jié)合蛋白質(zhì)組學(xué)高通量技術(shù)，鑒定受LMP1調(diào)控的下游功能效應(yīng)蛋白質(zhì)分子(磷酸化蛋白質(zhì)分子)；然后采用傳統(tǒng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究策略建立EB病毒瘤蛋白LMP1與下游功能效應(yīng)蛋白質(zhì)分子間的關(guān)系，初步構(gòu)建EB病毒瘤蛋白LMP1介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路網(wǎng)絡(luò)。　 擬采用磷酸酶抑制劑和磷酸基團(tuán)金屬親和純化(phosphatemetalaffinitychromatography，PMAC)兩種策略來富集磷酸

2、化蛋白質(zhì)。我們研究證實(shí)采用磷酸酶抑制劑抑制細(xì)胞內(nèi)磷酸酶活性可以有效提高細(xì)胞內(nèi)磷酸化蛋白質(zhì)的總量，并且呈劑量和時(shí)間依賴性，從而確定了絲/蘇氨酸磷酸酶抑制劑和酪氨酸磷酸酶抑制劑的最佳工作濃度和最佳處理時(shí)間?！　≡谝呀?jīng)建立磷酸化蛋白質(zhì)富集技術(shù)平臺(tái)的基礎(chǔ)上，確定了磷酸化蛋白質(zhì)富集結(jié)合蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)鑒定LMP1調(diào)節(jié)的磷酸化蛋白質(zhì)分子的可行性?！　”狙芯宽?xiàng)目通過將蛋白質(zhì)組學(xué)高通量技術(shù)引入到信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究中，鑒定EB病毒瘤蛋白LMP1調(diào)節(jié)的磷酸