藥物0412抗慢性肝損傷作用的實驗研究.pdf

1、目的觀察藥物0412對CCl4誘導的慢性肝損傷大鼠肝功能酶譜和肝纖維化指標的變化及病理組織學的影響，探討該藥對慢性肝損傷的保護作用及其可能的作用機制；同時觀察大鼠慢性肝損傷的自然逆轉情況。 材料和方法采用雄性Wister大鼠，將CCl4與橄欖油(體積比4∶6)配成40％油劑，按0.3ml/100g體重腹腔注射，每周2次，第三周開始調整為0.2ml/100g體重，第四周末，將慢性肝損傷大鼠分為5組：模型對照組16只，藥物0412大

2、、中、小劑量治療組各10只，停CCl4組10只，另設正常對照組10只。第5周開始，模型對照組繼續(xù)使用CCL4，藥物0412大、中、小劑量治療組在繼續(xù)使用CCL4的同時分別以100mg/kg、50mg/kg、25mg/kg(藥物0412溶于蒸餾水)灌胃，每天1次，停CCl4組停用CCL4改生理鹽水處理，維持治療20天。實驗中常規(guī)觀察各組大鼠的精神狀態(tài)、活動情況、毛發(fā)光澤度、進食以及排泄情況。第七周末，大鼠禁食禁水12小時，稱體重，抽取大鼠

3、股動脈血并處死，處死的大鼠留取肝臟標本，稱肝重，觀察外形、色澤、質地和切面等情況，計算肝指數(shù)(肝濕重/體重)，并檢測肝功能指標：血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、白蛋白(ALB)、白球蛋白比(A/G)等；肝纖維化指標：血清透明質酸(HA)、肝組織羥脯氨酸(Hyp)；蘇木素伊紅染色和天狼紅染色觀察肝臟組織病理學改變，參照中華肝臟病學會肝纖維化學組的慢性肝炎分級分期標準及炎癥活動度、纖維化半定量計分系統(tǒng)進行分級

4、和評分；并行免疫組織化學法檢測α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的表達。 結果1.一般情況：從開始藥物0412治療至實驗結束過程中模型對照組死亡6只，藥物0412各治療組分別死亡4只，停CCl4組死亡2只。實驗中，模型對照組的大鼠在腹腔注射CCL4后均有趴伏，體態(tài)呆板，精神萎靡，食欲減退，行動遲緩等現(xiàn)象，一般經12-24小時后可恢復，并表現(xiàn)為毛發(fā)光澤度差，體重下降，多數(shù)大鼠出現(xiàn)腹瀉等癥狀。而各藥物治療組的大鼠在治療初期情況類似模型

5、對照組，治療后期情況較模型對照組為佳，體重略增長。停CCl4組大鼠在停止CCL4染毒后狀態(tài)明顯好于模型對照組。正常對照組大鼠精神狀態(tài)好，食欲佳，大便正常。 2.肝臟大體觀察：正常對照組被膜光滑，呈紅褐色，質地柔軟；模型對照組肝臟與膈肌及肝小葉間粘連嚴重，呈土黃色，質地偏硬，邊緣較鈍，胞膜表面粗糙，部分呈結節(jié)樣并附有白色膿狀物，其肝重比明顯高于正常對照組(P＜0.01)。藥物0412各治療組肝小葉間也有粘連，但程度較模型對照組輕，

6、色暗紅，質地中等，肝重比略高于正常對照組，但明顯低于模型對照組(P＜0.05)。停CCl4組的肝重比與正常對照組無差異，大體觀主要表現(xiàn)為肝小葉間粘連，色暗紅，質地中等，邊緣略鈍。 3.與正常對照組相比，模型對照組的ALT、AST水平明顯增高(P＜0.01)，ALB水平、A/G比值明顯下降(P＜0.01)；0412各治療組與正常對照組相比，其ALT、AST水平略高于正常對照組，但無明顯差異(P＞0.05)，其ALB水平及A/G值無

7、差異(P＞0.05)；0412各治療組與模型對照組相比，其ALT、AST水平明顯降低(P＜0.01)，大、中劑量治療組ALB水平明顯高于模型對照組(P＜0.05)，各組A/G值均高于模型對照組(P＜0.01)，說明各治療組的肝功能得到明顯改善。停CCl4組的ALT、AST水平與正常對照組相比也無明顯差異，但明顯低于模型對照組(P＜0.01)，其ALB水平低于正常對照組但高于模型對照組，A/G值明顯高于模型對照組(P＜0.01)。

8、 4.與正常對照組相比，模型對照組的HA水平明顯增高(P＜0.01)；0412各治療組與正常對照組之間的HA水平無差異(P＞0.05)，與模型對照組相比，其HA水平均明顯降低(P＜0.05)；停CCl4組HA水平略高于正常對照組(P＞0.05)，但明顯低于模型對照組(P＜0.05)。 5.與正常對照組相比，模型對照組的肝組織Hyp水平明顯增高(P＜0.01)；0412各治療組的Hyp水平較模型對照組均明顯降低(P＜0.01)，而

9、與正常對照組之間無明顯差異(P＞0.05)。停CCl4組Hyp水平略高于正常對照組(P＞0.05)，但明顯低于模型對照組(P＜0.01)。 6.HE和天狼紅染色顯示：正常對照組肝小葉結構清晰，肝索以中央靜脈為中心呈放射狀排列，匯管區(qū)無炎癥細胞浸潤，未見纖維組織增生；模型對照組可見肝細胞出現(xiàn)廣泛脂肪變性，肝組織有點、灶性壞死等并伴炎癥細胞浸潤，膠原纖維組織呈明顯束狀增生，自中央靜脈及匯管區(qū)向肝小葉內延伸、分割，形成明顯的纖維間隔；

10、藥物0412各治療組：肝小葉結構清晰，未見炎癥細胞浸潤，脂肪變性、纖維化病變明顯輕于模型對照組；停CCl4組病理學改變接近正常對照組，無炎癥，無脂肪變性，偶有竇周或小葉內輕微纖維化。 7.α-SMA在正常對照組、各治療組及停CCl4組的表達局限于血管平滑肌細胞中，呈棕黃色；在模型對照組中，α-SMA還表達在匯管區(qū)及肝竇壁上。 結論藥物0412可以通過減輕肝組織損傷的形態(tài)學變化，降低血清ALT、AST、HA及肝臟組織Hyp