十味甘寧散對急慢性肝損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、肝病是困擾人類健康的一類嚴(yán)重疾病，十味肝寧散驗方是藏醫(yī)在臨床上用于治療肝纖維化和肝硬化的藏藥驗方。某公司以原有十味甘寧散驗方為基礎(chǔ)進(jìn)行開發(fā)研究，通過優(yōu)化工藝，研發(fā)出藏藥十味肝寧散制劑。實驗選取三種急性肝損傷模型和一種慢性肝損傷模型：CCl4小鼠急性肝損傷模型、對乙酰氨基酚小鼠急性肝損傷模型、D-氨基半乳糖大鼠急性肝損傷模型，和 CCl4大鼠慢性肝纖維化模型來進(jìn)行藥效實驗，比較十味肝寧散和十味肝寧散對照品（不含綠松石）在急慢性肝損傷中的保

2、護(hù)作用。
　　實驗方法：每個實驗中實驗動物分為9組：正常對照組、模型對照組、陽性對照組（聯(lián)苯雙酯）、十味肝寧散低、中、高劑量組（小鼠：0.47g/kg、1.41g/kg、2.82g/kg；大鼠：0.235g/kg、0.705g/kg、1.410g/kg），十味肝寧散對照品低、中、高劑量組（小鼠：0.47g/kg、1.41g/kg、2.82g/kg；大鼠：0.235g/kg、0.705g/kg、1.410g/kg）。模型構(gòu)建成功后，

3、所有動物采血、剖殺，測定血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase，ALT）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate aminotransferase，AST）、總蛋白（total protein，TP）、白蛋白（albumin，ALB）含量并進(jìn)行病理學(xué)觀察。四種動物模型的復(fù)制過程如下。
　　CCl4小鼠急性肝損傷模型：除正常對照組外，一次性灌胃1％CCl4花生油溶液5mL/kg，禁食16h后進(jìn)行處理。

4、
　　對乙酰氨基酚小鼠急性肝損傷模型：末次給藥前16h開始禁食，末次給藥1h后除正常對照組外，一次性腹腔注射對乙酰氨基酚300mg/kg，末次給藥24h后進(jìn)行處理。
　　D-氨基半乳糖大鼠急性肝損傷模型：末次給藥后禁食8h，除正常對照組外，一次性腹腔注射10%的D-氨基半乳糖800mL/kg，12h后進(jìn)行處理。
　　CCl4大鼠慢性肝纖維化模型：除正常對照組外，大鼠每周兩次灌胃50% CCl4溶液1mL/kg，持續(xù)造模

5、13周，末次給藥后禁食12h，取血測定ALT、AST、TP、ALB含量，利用放免法測血清透明質(zhì)酸（hyaluronic acid，HA）、層黏蛋白（laminin， LN）、Ⅳ型膠原（typeⅣ collagen，CⅣ）水平，用ELISA試劑盒測血清轉(zhuǎn)化生長因子β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）含量，取肝臟固定制作病理切片HE染色觀察，免疫組化觀察肝臟中平滑肌肌動蛋白-α（α-smooth

6、muscle acting，α-SMA）的表達(dá)。
　　實驗結(jié)果：本研究表明十味肝寧散對CCl4引起的小鼠急性肝損傷具有保護(hù)作用，能夠抑制血清ALT、AST的升高。十味肝寧散對對乙酰氨基酚和D-氨基半乳糖造成的急性肝損傷模型的保護(hù)作用不明顯。十味肝寧散對 CCl4慢性肝損傷模型表現(xiàn)出良好的抗纖維化作用，可降低血清轉(zhuǎn)氨酶水平，提升血清 TP和ALB水平，降低血清HA和LN水平，減少血清中TGF-β1的分泌，抑制結(jié)締組織增生，減輕肝臟的