不同地區(qū)蘇云金芽胞桿菌vip3Aα基因的鑒定及殺蟲活性分析.pdf

1、全球農(nóng)業(yè)的健康發(fā)展一直受到農(nóng)業(yè)害蟲的制約，農(nóng)業(yè)害蟲的防控和治理，多年來主要依靠化學(xué)農(nóng)藥?；瘜W(xué)農(nóng)藥大劑量、大范圍的施用對生態(tài)系統(tǒng)造成非常嚴(yán)重的破壞，對全球農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展構(gòu)成威脅。采用生防的手段可以有效的解決這些難題，蘇云金芽胞桿菌（Bt）殺蟲活性高，麗且對人、畜等非靶生物無害，現(xiàn)已成為使用最為普遍的環(huán)境友好型殺蟲微生物。然而，長期施用Bt制劑使部分敏感的農(nóng)業(yè)害蟲產(chǎn)生了抗性，目前應(yīng)用的Bt菌株存在殺蟲譜窄和毒力低等缺點(diǎn)，因此要篩選新型高毒

2、力的Bt基因來滿足生防的需求，擴(kuò)大Bt的殺蟲譜，豐富轉(zhuǎn)基因資源。
　　本研究首次比較了中國不同氣候類型（熱帶-海南省，亞熱帶-廣西省，溫帶-黑龍江省）的Bt菌株和vip基因的分布情況。從海南841份土樣中分離出156株Bt菌(18.55％)，從廣西1420份土樣中分離出356株Bt菌(25.07％)，從黑龍江1010份土樣中分離出167株Bt菌(16.53％);從海南的156株Bt菌鑒定出22個(gè)vip3基因(14.10％)，廣西的

3、356株Bt菌鑒定出2個(gè)vip3基因(5.62％)，黑龍江的156株Bt菌沒有鑒定出vip3基因(0％)。本實(shí)驗(yàn)利用限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-RFLP)方法成功從海南的SL3和SL4 Bt菌株分別鑒定、克隆出vip3Aa的全長基因，并獲得登錄號KP309808和KT792883，經(jīng)Bt國際命名委員會正式命名為vip3Aa57和vip3Aa62。將這兩個(gè)基因插入到表達(dá)載體pET-21b，轉(zhuǎn)化菌株Rosetta(DE3)，在

4、低溫條件下均表達(dá)88 kDa大小的蛋白。將蛋白進(jìn)行生物活性測定，結(jié)果顯示Vip3Aa57蛋白對甜菜蛾(Spodoptera exigua)有體重抑制的作用，對棉鈴蟲(Heliothis armigera)無明顯的生物活性;Vip3Aa62蛋白對甜菜蛾具有較好的殺蟲活性，LC50為5.124 ng/mg;對棉鈴蟲活性較低，LC50為870.1 ng/mg。石蠟切片結(jié)果顯示Vip3Aa57蛋白使甜菜蛾中腸細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生變化。通過這些研究結(jié)果