HERG在不同分類骨腫瘤中的表達及其對骨肉瘤細胞系增殖影響的研究.pdf

1、背景:HERG(Humanether-à-gò-gò-relatedgene)最早在豚鼠心肌細胞中被發(fā)現(xiàn)，之后發(fā)現(xiàn)其存在于多種不同種類動物的心肌細胞中。HERG基因是進化保守的、電壓門控外向整流鉀離子通道的EAG(ether-à-gò-gò)家族成員之一，其編碼的HERG鉀通道是一種特殊類型的鉀通道，具有內(nèi)向整流特性。大量研究表明，HERG選擇性表達于多種組織來源的腫瘤細胞，對腫瘤的生物學行為產(chǎn)生廣泛的影響，與腫瘤細胞增殖、凋亡、分化及

2、侵襲性密切相關，而在相應來源的正常細胞中不表達。其在腫瘤中的選擇性表達可能代表了腫瘤細胞生長和腫瘤發(fā)展的有利因素，具有潛在的重要臨床應用價值。最近，阻斷鉀離子通道對影響腫瘤細胞增殖情況的研究已經(jīng)成為熱點，HERG有可能通過其表達的電壓門控性鉀離子通道，影響腫瘤細胞的膜電位，從而有助于腫瘤細胞的存活和增殖，但具體機制尚不明了，另外其在骨科常見腫瘤中的表達情況及其與骨科惡性腫瘤細胞增殖的關系，尚缺乏充足的研究。
　　目的:本研究旨在探

3、討HERG在不同分類骨科常見腫瘤組織標本及其在骨肉瘤細胞系MG-63、SOSP-9607、Saos-2中的表達情況，分析HERG在骨肉瘤細胞系及臨床標本中的表達與腫瘤病人臨床病理學特征之間有無關聯(lián)，探索HERG蛋白在不同骨腫瘤中的表達水平，以探求其與腫瘤分化程度，惡性程度之間的關系。同時驗證對其抑制可對骨肉瘤細胞系增殖產(chǎn)生的影響。以期為未來骨腫瘤的臨床診斷與治療，尤其是化療能夠有一定的指導性作用。
　　方法:1、經(jīng)醫(yī)學倫理委員會通

4、過和病人同意，根據(jù)常見骨腫瘤分類表選取臨床骨腫瘤病例組織標本60例，歸納整理。2、相同病例經(jīng)組織切片，免疫組化染色，鏡下觀察HERG表達水平。3、分別提取臨床各個標本組織mRNA，RT-PCR方法觀察其HERG表達水平差異。4、臨床組織標本提取總蛋白，Westernblot觀察其HERG蛋白表達水平。5、復蘇培養(yǎng)骨肉瘤細胞系MG63、SOSP-9607、Saos-2，提取mRNA，RT-PCR方法檢測其HERG表達水平。6、非特異性鉀離

5、子通道抑制劑4-AP，HERG抑制劑E-4031不同濃度作用于三株細胞系，MTT法檢測其增殖變化。
　　結(jié)果:1、臨床標本資料經(jīng)歸納整理，得到病例共60例，經(jīng)我科手術(shù)室采集于2007年-2009年。其中男性38例，女性22例。經(jīng)分析歸納整理，其中良性25例，惡性35例，詳情見下文。2、免疫組化染色顯示：不同惡性程度的腫瘤HERG的表達水平和位置有所不同，正常骨組織中不表達。3、RT-PCR結(jié)果顯示：在半定量程序幫助下，可觀察到HE

6、RG在正常骨組織中無表達，而其mRNA在臨床標本中表達水平與腫瘤起源、惡性程度有關的結(jié)果。4、WesternBlot顯示蛋白水平表達與腫瘤惡性程度有關。5、RT-PCR顯示：骨肉瘤細胞系MG63、SOSP-9607、Saos-2中HERG均有較高程度的表達。6、將不同濃度的通道抑制劑分別加入三株人骨肉瘤細胞系培養(yǎng)基中，培養(yǎng)48h后，MTT法檢測各組A值的變化，可以評價不同的鉀離子通道抑制劑對人骨肉瘤細胞生長的抑制作用，結(jié)果是特異性的HE

7、RG通道抑制劑E—4031對三株骨肉瘤細胞系的增殖沒有明顯的影響，而非特性的Kv通道抑制劑4-AP藥物濃度在3mmol和5mmol時對細胞增殖影響明顯，有顯著性意義(P<0.01)。
　　結(jié)論:HERG參與了許多骨腫瘤的發(fā)生、生長與演變，其表達水平隨著腫瘤的起源不同，惡性程度不同而存在差異，許多骨腫瘤都是HERG基因表達的潛在靶點。而在良性或低度惡性的腫瘤中，HERG不表達或者低度表達。只有在為數(shù)不多的少數(shù)幾種良性病變中有較低程度