惡性瘧原蟲谷氨酸脫氫酶基因的克隆、表達及產物抗原活性究.pdf

1、該研究利用PCR技術釣取了惡性瘧原蟲海南株(FCC1/HN)谷氨酸脫氫酶編碼基因,克隆入pGEX-4T-1表達載體,測定的序列與惡性瘧原蟲Thailand株GDH基因序列進行比較,其推導的氨基酸序列與不同物種的GDH序列進行同源性分析,以探討惡性瘧原蟲谷氨酸脫氫酶(GDHpf)獨特的理化、生物學及酶學特性的分子機制.并在大腸桿菌BL21中進行了誘導表達,純化重組蛋白免疫小鼠制備多克隆抗體,運用ELISA、Western-blot進行抗原

2、性分析,為下一步篩選單抗用于GDH免疫膠體金診斷試劑(GICA)盒的研制奠定基礎.結果顯示,利用PCR技術成功地釣取了編碼中國惡性瘧原蟲海南株(FCC1/HN)谷氨酸脫氫酶的基因序列.將GDHpf基因克隆到pGEX-4T-1表達質粒,經PCR、限制性酶切分析等鑒定,構建了pGEX-GDH重組表達質粒,首次測定了編碼中國惡性瘧原蟲海南株(FCC1/HN)谷氨酸脫氫酶編碼基因的全序列,大小為1413bp,無內含子.惡性瘧原蟲海南株GDH基因

3、與Thailand株GDH基因相比,兩者同源性高達99.86﹪,僅存在2個點突變,且均為同義突變,兩者推導的氨基酸序列完全相同,說明該基因在不同的惡性瘧原蟲株之間高度保守.同源性分析結果表明,惡性瘧原蟲海南株GDH氨基酸序列與人的GDH同工酶、藍氏賈第鞭毛蟲、克魯氏錐蟲和細菌GDH相比,同源性較低,即使與BLAST檢索出的具有最高同源性的藍氏賈第鞭毛蟲相比,也僅有57.90﹪的氨基酸殘基相同,因此,瘧原蟲GDH明顯不同于其它生物GDH.