自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤對(duì)胃癌MGC-803細(xì)胞順鉑藥物敏感性影響的研究.pdf

1、目的：
　　探討3-甲基腺嘌呤對(duì)胃癌MGC-803細(xì)胞自噬的抑制作用，及對(duì)其增殖、凋亡和對(duì)順鉑敏感性的影響及可能機(jī)制。
　　方法:
　　體外培養(yǎng)人胃癌MGC-803細(xì)胞，將其分為空白對(duì)照組（Control組）、3-甲基腺嘌呤組（3-MA組）、順鉑組（DDP組）及3-甲基腺嘌呤+順鉑（3-MA+DDP組）。分別采用 MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力；平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞克隆形成能力；掃描電鏡檢測(cè)自噬體和自噬溶酶體形成情況；免

2、疫組化檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白LC3Ⅱ聚集情況；Elisa法檢測(cè)細(xì)胞核小體表達(dá)情況；Western Blot檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白Beclin1、PI3KⅢ及凋亡相關(guān)蛋白caspase3、caspase9表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1.MTT結(jié)果顯示隨著順鉑濃度的增加（0-15μg/ml）胃癌MGC-803細(xì)胞的增殖活力逐漸下降。順鉑對(duì)胃癌MGC-803細(xì)胞增殖能力的抑制作用具有濃度（0-15μg/ml）依賴性、時(shí)間（0-48h）依賴性。

3、其24h半數(shù)抑制濃度(IC50)為10.68μg/ml時(shí)，48hIC50為8.26μg/ml。
　　2.3-MA組與 Control組相比，電鏡觀察到3-MA組自噬體、自噬溶酶體數(shù)量較Control組明顯減少。免疫組化LC3Ⅱ平均吸光度3-MA組（923.33±68.07）顯著低于Control組（6633.33±351.90）（P<0.05）。Western Blot檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白Beclin1相對(duì)表達(dá)量3-MA組（0.77±

4、0.04）顯著低于 Control組（1.04±0.08）（P<0.05），PI3KⅢ相對(duì)表達(dá)量3-MA組（0.78±0.04）顯著低于Control組（0.89±0.03）（P<0.05）。細(xì)胞增殖能力3-MA組（98.48±2.21％）與 Control組（100±0.00%）相比無(wú)顯著性差異（P>0.05）?？寺⌒纬陕?-MA組（94.33±2.01%）與Control組（98.33±2.08%）相比無(wú)顯著性差異（P>0.05）。

5、核小體形成量3-MA組（68.19±16.27pg/mg）與Control組（65.24±13.33 pg/mg）相比無(wú)顯著性差異（P>0.05）。Western Blot檢測(cè)凋亡蛋白caspase3、caspase9相對(duì)表達(dá)水平3-MA組（0.72±0.04、0.70±0.06）與 Control組（0.64±0.06、0.60±0.08）相比無(wú)顯著性差異（P>0.05）。
　　3.DDP組與Control組相比，電鏡觀察到與C

6、ontrol組相比DDP組自噬體、自噬溶酶體大量堆積。免疫組化LC3Ⅱ平均吸光度DDP組（12433.33±513.36）顯著高于Control組（6633.33±351.90）（P<0.05）。Western Blot檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白Beclin1相對(duì)表達(dá)量 DDP組（1.82±0.14）顯著高于 Control組（1.04±0.08）（P<0.05），PI3KⅢ相對(duì)表達(dá)量DDP組（1.30±0.89）顯著高于Control組（0.8

7、9±0.03）（P<0.05）。細(xì)胞活力DDP組（56.90±2.21%）顯著低于Control組（100±0.00%）（P<0.05）?？寺⌒纬陕蔇DP組（45.00±5.00%）顯著低于Control組（98.33±2.08%）（P<0.05）。核小體形成量 DDP組（831.52±60.98pg/mg）顯著高于與Control組（65.24±13.33 pg/mg）（P<0.05）。Western Blot檢測(cè)凋亡蛋白caspas

8、e3、caspase9相對(duì)表達(dá)水平DDP組（1.14±0.06、1.22±0.11）顯著高于Control組（0.64±0.06、0.60±0.08）（P<0.05）。
　　4.3-MA+DDP組與DDP組相比，電鏡觀察到3-MA+DDP組自噬體、自噬溶酶體較DDP組明顯減少。免疫組化LC3Ⅱ平均吸光度3-MA+DDP組（9866.67±321.46）顯著低于DDP組（12433.33±513.36）（P<0.05）。Wester

9、n Blot檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白Beclin1相對(duì)表達(dá)量3-MA+DDP組（1.52±0.08）顯著低于DDP組（1.82±0.14）（P<0.05），PI3KⅢ相對(duì)表達(dá)量3-MA+DDP組（0.93±0.04）顯著低于 DDP組（1.30±0.89）（P<0.05）。細(xì)胞活力3-MA+DDP組（43.95±3.71%）顯著低于DDP組（56.90±2.21%）（P<0.05）。克隆形成率3-MA+DDP組（23.33±3.51%）顯著低于

10、DDP組（45.00±5.00%）（P<0.05）。核小體形成量3-MA+DDP組（1083.60±104.15pg/mg）顯著高于與DDP組（831.52±60.98pg/mg）（P<0.05）。Western Blot檢測(cè)凋亡蛋白caspase3、caspase9相對(duì)表達(dá)水平3-MA+DDP組（1.35±0.08、1.63±0.12）顯著高于DDP組（1.14±0.06、1.22±0.11）（P<0.05）。
　　結(jié)論：