鞘氨醇激酶1抑制劑聯(lián)合5-FU對(duì)胃癌MGC-803細(xì)胞作用及可能機(jī)制.pdf

1、背景：
　　胃癌是目前世界上第四大最常見的癌癥，新近診斷的腫瘤病例中8％為胃惡性腫瘤。盡管在近數(shù)十年以來(lái)手術(shù)方法，化療和支持治療得到提高，但其總體生存時(shí)間并沒有顯著提高。胃癌已成為世界范圍內(nèi)癌癥致死病例中的第二大死因（738，000死亡病例，約占總數(shù)9.7％）?，F(xiàn)胃癌的發(fā)病原因尚不明確，由于早期階段無(wú)明顯癥狀，因此約有65％的胃癌病人在確診時(shí)已出現(xiàn)局部或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，從而不能進(jìn)行手術(shù)切除，這使得治療變得困難。轉(zhuǎn)移性、進(jìn)展性胃癌患者的5

2、年生存率很低，僅有5％-15％。對(duì)于胃癌來(lái)說(shuō)，化療是除手術(shù)切除外的一種重要的治療手段，但由于腫瘤細(xì)胞化療耐藥性的出現(xiàn)，使得這一治療的有效性下降。尋找腫瘤治療新的靶點(diǎn)或化療增敏藥物，已成為胃癌臨床治療中亟待解決的問(wèn)題。
　　目的：
　　探討鞘氨醇激酶-1(SphK1)抑制劑N，N-二甲基鞘氨醇(DMS)與5-氟尿嘧啶(5-FU)聯(lián)用對(duì)胃癌MGC-803細(xì)胞增殖和凋亡的影響及其可能的機(jī)制。
　　方法：
　　體外常規(guī)培

3、養(yǎng)胃癌MGC-803細(xì)胞，采用MTT比色法來(lái)檢測(cè)不同濃度DMS、5-FU單藥和（或）兩藥聯(lián)合對(duì)MGC-803細(xì)胞增殖的抑制情況;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其細(xì)胞周期分布和凋亡率;Westernblot法測(cè)定藥物作用后MGC-803細(xì)胞中SphK1、TS、DPD、NF-κBp65和bcl-2蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：
　　1.DMS和5-FU單藥及聯(lián)合作用對(duì)MGC-803細(xì)胞增殖抑制的影響(1)不同濃度DMS(分別為1.25、2.5、5

4、、10和20μmol/L)、5-FU(100μmol/L)均能夠抑制胃癌MGC-803細(xì)胞增殖。且隨著DMS藥物濃度的增加，作用時(shí)間的延長(zhǎng)，其增殖抑制率增加，呈現(xiàn)出濃度-時(shí)間依賴性。(2)與DMS、5-FU單藥組相比，兩藥聯(lián)合對(duì)胃癌MGC-803細(xì)胞的增殖抑制作用顯著增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2.DMS和5-FU單藥及聯(lián)合作用對(duì)MGC-803細(xì)胞周期分布的影響與空白對(duì)照組比較，DMS(5μmol/L)單藥作用

5、胃癌MGC-803細(xì)胞后其細(xì)胞周期的各期比例無(wú)明顯變化（P＞0.05）;5-FU(100μmol/L)組細(xì)胞G0/G1期細(xì)胞比例增加至(61.71±1.33)％，S期細(xì)胞比例減少至(28.06±1.09)％（P＜0.05）;聯(lián)合組G0/G1期細(xì)胞比例進(jìn)一步增加至(63.34±1.64)％，但與5-FU組比較，其差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3.DMS和5-FU單藥及聯(lián)合作用對(duì)MGC-803細(xì)胞凋亡的影響(1)1.25

6、、2.5、5.0和10μmol/LDMS單藥分別作用于MGC-803細(xì)胞48h后，細(xì)胞凋亡率分別為(10.27±0.91)％、(14.77±1.35)％、(20.07±1.56)％和(34.53±1.92)％，而對(duì)照組細(xì)胞凋亡率為(0.53±0.06)％。統(tǒng)計(jì)分析后顯示，隨著DMS濃度的增加，MGC-803細(xì)胞凋亡率也逐漸上升，呈明顯的濃度依賴性，與空白對(duì)照組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(2)DMS(5μmol/L)、5-

7、FU(100μmol/L)單藥及兩藥聯(lián)合作用于MGC-803細(xì)胞48h后，MGC-803細(xì)胞的凋亡率分別為(20.07±1.56)％、(21.63±1.80)％和(25.60±1.28)％。統(tǒng)計(jì)分析后顯示，DMS與5-FU聯(lián)合應(yīng)用時(shí)可明顯增加MGC-803細(xì)胞凋亡率，高于DMS組、5-FU組和對(duì)照組（P＜0.05）。
　　4.DMS和5-FU單藥及聯(lián)合作用對(duì)MGC-803細(xì)胞SphK1、TS、DPD、NF-κBp65和bcl-2蛋

8、白表達(dá)的影響Western-blot檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，DMS單藥組和聯(lián)合組SphK1、NF-κBp65、bcl-2蛋白表達(dá)水平均明顯下降（P＜0.05），且與DMS藥物濃度相關(guān);而聯(lián)合組SphK1、NF-κBp65、bcl-2蛋白表達(dá)水平均明顯低于DMS單藥組(P＜0.05);而各組細(xì)胞TS、DPD蛋白的表達(dá)無(wú)明顯變化（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　SphK1抑制劑DMS能夠抑制胃癌MGC-803細(xì)胞的增殖并誘