BRCAA1基因對胃癌MGC-803細胞的作用機制研究.pdf

1、目的：本研究旨在探討brcaa1基因敲除后對胃癌MGC-803細胞的作用機制。 方法：根據(jù)brcaa1基因序列設計shRNA，構建brcaa1基因shRNA載體。用FuGene HD將構建的shRNA-brcaa1質粒與陰性對照質粒shRNA-N轉染胃癌MGC-803細胞，24 h后用熒光顯微鏡觀察轉染效率，用實時定量PCR檢測BRCAA1和GAPDH基因mRNA表達水平；用MTT法檢測轉染后24 h、48 h與72 h的細胞增

2、殖水平；用Annxin-V PE/7AAD檢測轉染24 h的細胞凋亡水平；用Western blotting檢測轉染48 h后的凋亡相關蛋白的表達水平；構建胃癌腫瘤動物模型并進行動物實驗。 結果：BRCAA1 siRNA表達質粒MGC-803細胞 24 h的轉染效率為(81.2±2.6)％。轉染后48 h MGC-803細胞的BRCAA1 mRNA水平下降了61.4％；MGC-803細胞增殖的抑制率達45.0％；轉染siRNA細

3、胞的凋亡率明顯高于未轉染細胞和對照質粒轉染細胞[(14.4±1.6)％VS(5.4±2.0)％，(4.4±2.5)％，P<0.05]。轉染siRNA細胞的凋亡相關蛋白Rb與Bax的表達量顯著增加（P<0.05），Bcl-2的表達量顯著減少（P<0.05）；注射BRCAA1 siRNA表達質粒7天后，腫瘤生長速度顯著下降（P<0.05）。 結論：BRCAA1基因的沉默可有效抑制人胃癌MGC-803細胞的增殖和誘導細胞凋亡，其機制與