小型豬痰瘀互結(jié)證冠心病模型的病理學(xué)研究及中藥方劑的干預(yù)作用.pdf

1、冠心病是危害中、老年人的嚴(yán)重疾病之一,在許多國(guó)家和地區(qū)的發(fā)病率和死亡率都很高,已成為嚴(yán)重危害人類健康的疾病。因此,抗冠心病藥物的研究在世界各國(guó)日益受到重視。我國(guó)傳統(tǒng)方藥對(duì)冠心病保護(hù)作用的研究也日益受到重視。
　　 對(duì)冠心病的研究,建立理想的動(dòng)物模型必不可少。本實(shí)驗(yàn)室選用中國(guó)實(shí)驗(yàn)小型豬采用介入法球囊拉傷冠狀動(dòng)脈左前降支配合高脂飼料喂養(yǎng),獲得痰瘀互結(jié)證冠心病模型,其病理過(guò)程與人類極相似。
　　 本實(shí)驗(yàn)室在中國(guó)小型豬痰瘀互結(jié)證

2、冠心病模型上,選用瓜蔞薤白半夏湯合血府逐瘀湯作為痰瘀同治方、瓜蔞薤白半夏湯作為化痰方、血府逐瘀湯作為祛痰方進(jìn)行治療,對(duì)此模型給予三種不同的傳統(tǒng)方藥,探討了方證相應(yīng)理論的規(guī)律與本質(zhì)(詳見(jiàn)李欣志博士論文)。本實(shí)驗(yàn)在此基礎(chǔ)上,對(duì)此模型的冠狀血管損傷節(jié)段和梗死交界區(qū)心肌,進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)分析；并觀察傳統(tǒng)方藥對(duì)冠狀動(dòng)脈及心肌的病理形態(tài)學(xué)的干預(yù)作用。并觀察心肌凋亡細(xì)胞及bax、bcl-2、caspase-3、caspase-9表達(dá)在模型中的變化,并觀

3、察傳統(tǒng)方藥對(duì)心肌凋亡細(xì)胞及bax、bcl-2、caspase-3、caspase-9表達(dá)的干預(yù)作用。材料和方法:
　　 30只中國(guó)實(shí)驗(yàn)小型豬(Chinese experimental miniature swine,CEMS)隨機(jī)分為6組:(1)正常對(duì)照組(Con):普通飼料,不拉傷冠狀血管,n=5；(2)痰瘀互結(jié)證候模型組(Model):冠狀動(dòng)脈拉傷+高脂飼料,n=5；(3)西藥對(duì)照組(XY):冠狀動(dòng)脈拉傷+高脂飼料+辛伐他汀

4、0.5mg/kg,n=5；(4)化痰組(HT):冠狀動(dòng)脈拉傷+高脂飼料+瓜蔞薤白半夏湯6g生藥/kg,n=5；(5)祛瘀組(QY):冠狀動(dòng)脈拉傷+高脂飼料+血府逐瘀湯8g生藥/kg,n=5；(6)痰瘀同治組(TY):冠狀動(dòng)脈拉傷+高脂飼料+瓜蔞薤白半夏湯3g生藥/kg合血府逐瘀湯4g生藥/kg,n=5。冠狀動(dòng)脈拉傷后第2天開(kāi)始給藥,同時(shí)繼續(xù)喂養(yǎng)高脂飼料,持續(xù)8周。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,取實(shí)驗(yàn)各組的冠狀血管損傷節(jié)段和梗死交界區(qū)心肌制

5、成石蠟切片。用H.E染色法、彈力纖維EVG染色法、計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)、用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)受損血管管腔內(nèi)膜增生及狹窄情況進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察、數(shù)據(jù)測(cè)量和數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析:用H.E染色法和Masson三色染色法對(duì)受累心肌進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析。用TUNEL標(biāo)記法識(shí)別心肌凋亡細(xì)胞,用免疫組織化學(xué)染色法表達(dá)bax、bcl-2基因蛋白和caspase-3、caspase-9蛋白酶,觀察心肌凋亡細(xì)胞及bax、bcl-2、caspase-3、caspase-

6、9表達(dá)在模型中的變化,并觀察中藥方劑對(duì)心肌細(xì)胞凋亡及bax、bcl-2、caspase-3、caspase-9表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1、模型組冠狀動(dòng)脈管腔出現(xiàn)不同程度的偏心性狹窄,與對(duì)照組相比,差異極顯著(P<0.01)。各給藥組冠狀動(dòng)脈管腔仍有不同程度的狹窄,但與模型組有顯著減輕,其中化痰組、祛瘀組、痰瘀同治組有極顯著差異(P<0.01),西藥組有明顯差異(P<0.05)。
　　 2.模型組心肌內(nèi)可

7、見(jiàn)大片狀心肌纖維斷裂缺失,并被纖維組織填充替代,部分伴灶狀肌纖維變性壞死、脂肪浸潤(rùn)及少數(shù)炎性細(xì)胞浸潤(rùn),與對(duì)照組相比,差異極顯著(P<0.01)。各給藥組,較模型組有明顯減輕,其中化痰組、西藥組有極顯著差異(P<0.01),祛瘀組、痰瘀同治組有明顯差異(P<0.05)。
　　 3.用計(jì)算機(jī)圖像分析軟件測(cè)量冠狀動(dòng)脈并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn):模型組管腔與對(duì)照組管腔相比顯著狹窄(P<0.01)；模型組的管腔最大內(nèi)膜厚度與對(duì)照組相比明顯增厚(

8、P<0.01)；模型組的管腔最大內(nèi)膜厚度與中膜厚度的比值明顯大于對(duì)照組(P<0.01)。各給藥組冠狀動(dòng)脈管腔狹窄程度明顯輕于模型組(P<0.01)；各給藥組的管腔最大內(nèi)膜厚度明顯比模型組薄(P<0.01)；各給藥組的管腔最大內(nèi)膜厚度與中膜厚度的比值顯著小于模型組(P<0.01)。
　　 4.模型組bcl-2基因蛋白表達(dá)和bcl-2/bax的比值均明顯低于對(duì)照組(P<0.01),bax基因蛋白表達(dá)比對(duì)照組明顯增強(qiáng)(P<0.01)；

9、痰瘀同治組bcl-2基因蛋白表達(dá)和bcl-2/bax的比值均顯著高于模型組(P<0.01),bax基因蛋白表達(dá)較模型組顯著降低(P<0.01)。
　　 5.模型組caspase-3、caspase-9表達(dá)均明顯比對(duì)照組增強(qiáng)(P<0.01)；痰瘀同治組caspase-3、caspase-9表達(dá)均顯著低于模型組(P<0.01)。
　　 6.TUNEI,法檢測(cè)各組心肌細(xì)胞凋亡情況:對(duì)照組、模型組及痰瘀同治組的凋亡指數(shù)(apop

10、tosis index,AI)分別為0.92％、27.68％及17.28％,模型組和痰瘀同治組的凋亡細(xì)胞數(shù)均比對(duì)照組的多,凋亡指數(shù)均大于對(duì)照組(P<0.01)；模型組和痰瘀同治組相比,前者的凋亡細(xì)胞數(shù)明顯多于后者且凋亡指數(shù)也大于后者(P<0.01)。
　　 結(jié)論
　　 1.從病理學(xué)角度證實(shí)了中國(guó)小型豬痰瘀互結(jié)證冠心病模型的成立。
　　 2.傳統(tǒng)方藥對(duì)痰瘀互結(jié)證冠心病模型有明顯的防治效果。
　　 3.傳統(tǒng)方