嚴重少精子癥患者血清相關激素測定與精子超微形態(tài)及Y染色體微缺失檢測研究.pdf

1、研究背景：據(jù)世界衛(wèi)生組織的研究顯示，人類的生殖能力在近半個世紀的時間內呈持續(xù)下降趨勢，特別是男性的生殖能力，據(jù)統(tǒng)計精子的數(shù)量和質量平均值從五十年前的每毫升一億一千萬到現(xiàn)在的二千六百萬。在我國統(tǒng)計學分析發(fā)現(xiàn)不孕不育患者中有一半是男性因素造成的。單精子胞漿內注射技術(intracytoplasmicsperm injection，ICSI)的成功使男性少精子癥、無精子癥患者看到了希望，通過治療能夠成為生物學父親。那么造成男性不育的原因如何，

2、外周血的激素水平哪項更能夠準確反應睪丸的生精功能，精子在形態(tài)學方面有何改變以及男性不育的遺傳學問題等等已成為當今輔助生殖領域的熱點問題。 目的： 1．研究嚴重少精子癥患者外周血清相關激素：睪酮(testosterone，T)、游離睪酮(free testosterone，F(xiàn)T)、性激素結合球蛋白 (Sex homone-bindingglobulin，SHBG)、血清抑制素B(inhibin B，IHN-B)水平與睪丸生

3、精功能間的關系。 2．運用掃描電子顯微鏡(scaiming electron microscope，SEM)觀察測定嚴重少精子癥患者精子表面結構特點，檢測精子畸形指數(shù) (sperm defomity index，SDI)，與精子常規(guī)染色 (Diff-Ouik法) 光學顯微鏡觀察進行對比研究。 3．進行精子DNA提取，Y染色體微缺失(Y cheornosome microdeletion analysis)研究，比較體細胞

4、Y染色體微缺失與配子Y染色體微缺失發(fā)生率。 方法： 1．嚴格按照 WHO 標準篩選分組，嚴重少精子癥患者為實驗組 (重復精予常規(guī)計算機分析檢測精子密度低于5×10<'6>/ml，經 2 次以上檢查并離心沉淀末見精子者除外)。對照組為已生育男性。于晨起間隔2小時抽取外周血兩次，離心分離血清，將兩次血清混勻后取適量混合，運用ELSA法測定外周血T、FT、SHBG、IHN-B進行檢測。 2.采取精液后運用梯度離心分離精

5、子，運用錫箔紙作為精子SEM載體，按SEM制樣程序制樣，觀察精子表面超微形態(tài)特點及缺陷；運用 Diff-Quik 法涂片常規(guī)染色精子，在光鏡下進行精子頭部缺陷、頸部缺陷、尾部缺陷記數(shù)觀察；比較兩種精子形態(tài)學檢測方法。 3.提取精子DNA，運用聚合酶鏈反應(polymerase chaillreaction，PCR) 特異地擴增Y染色體上的目標區(qū)域，進行精子Y染色體微缺失檢測和外周血Y染色體微缺失率檢測。 4.結果進行統(tǒng)計

6、學分析。 結果： 1.嚴重少精子癥患者外周血血清IHN-B 較對照組明顯降，差異有顯著性。血清T、FT、SHBG 與對照組相比差異無顯著性。 2.嚴重少精子癥患者的精子存在超微形態(tài)異常，SEM 觀察發(fā)現(xiàn)嚴重少精子癥患者SDI與對照組比較明顯增高(1.64±0.55和0.86±0.23，P<0.05)。 3.嚴重少精子患者精子Y染色體微缺失檢測發(fā)現(xiàn)存在無精子癥因子(azoospermia factor, A

7、ZF) C區(qū) (AZFc)缺失，其發(fā)生率為15％，較外周血AZFc檢測發(fā)生率6.7％明顯增高，差異具有顯著性差異。未發(fā)現(xiàn)AZFa、AZFb等其它缺失。 結論： 1.嚴重少精子癥患者的血清抑制素B檢測較T、FT、SHBG 等檢測指標能準確預測睪丸的生精功能。 2.嚴重少精子癥之精子存在表面超微結構異常，其SDI明顯高于對照組，SEM觀察精子較光學顯微鏡普通染色技術更能夠發(fā)現(xiàn)精子的頭頸部缺陷。 3.嚴重少精子

8、癥患者精子Y染色體微缺失檢測發(fā)現(xiàn)AZFc缺失陽性率明顯高于外周血檢測結果。 討論： 1．男性不育呈不斷上升趨勢，使得我們不得不正視這個問題，多年以來學術界一直尋求更好、更準確的研究指標來反應睪丸的生精功能，水研究選取了目前較為關注的幾個指標進行檢測比較，發(fā)現(xiàn) IHN-B 水平的高低能夠更為準確的反應精子的生成情況。 2．在精子掃描電子顯微鏡標本制樣觀測，具有獨特的優(yōu)點，能夠更為直觀發(fā)現(xiàn)精子的缺陷。通過對于一些反