HBx對(duì)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶3A-3B表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的：將乙肝病毒X基因（HBV X）導(dǎo)入人源性永生化非瘤性肝細(xì)胞株QSG7701細(xì)胞，觀察穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后QSG7701細(xì)胞中DNMT3A/3B的表達(dá)情況。
　　 方法：①本研究室前期構(gòu)建好的重組表達(dá)質(zhì)粒pcDNA-X及空載體pcDNA3.0分別轉(zhuǎn)染QSG7701細(xì)胞，經(jīng)含G418的選擇性培基篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HBV-X基因的細(xì)胞克?。╬cDNA-X/QSG7701）及穩(wěn)定轉(zhuǎn)染空載體pcDNA3.0的細(xì)胞克隆（pcDNA3.0/QSG7

2、701）。RT-PCR，Westem blot分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞中HBX mRNA和HBx蛋白的表達(dá)。②Real time-PCR檢測(cè)pcDNA-X/QSG7701細(xì)胞、pcDNA3.0/QSG7701細(xì)胞、QSG7701細(xì)胞中DNMT3A/3B mRNA的表達(dá)差異。③免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)pcDNA-X/QSG7701細(xì)胞、pcDNA3.0/QSG7701細(xì)胞、QSG7701細(xì)胞中DNMT3A/3B蛋白的表達(dá)差異。
　　 結(jié)果：①

3、RT-PCR，Western blot檢測(cè)顯示重組表達(dá)質(zhì)粒pcDNA-X轉(zhuǎn)染的QSG7701細(xì)胞（pcDNA-X/QSG7701）中有HBV XmRNA及HBx蛋白的穩(wěn)定表達(dá)。②Real time-PCR檢測(cè)顯示：pcDNA-X/QSG7701與pcDNA3.0/QSG7701、未轉(zhuǎn)染的QSG7701細(xì)胞相比，DNMT3A/3BmRNA表達(dá)均顯著升高。（P＜0.05）③免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)顯示：pcDNA-X/QSG7701與pcDNA

4、3.0/QSG7701、未轉(zhuǎn)染的QSG7701細(xì)胞相比，DNMT3A/3B蛋白的表達(dá)均顯著升高（P＜0.05）。
　　 結(jié)論：采用人源性永生化非瘤性肝細(xì)胞QSG7701為研究對(duì)象，建立了HBV-X穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系pcDNA-X/QSG7701，為進(jìn)一步探討HBx在HCC的發(fā)生發(fā)展過程中所起的作用，提供了一個(gè)有價(jià)值的細(xì)胞模型。HBV-X穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的人源性永生化非瘤性肝細(xì)胞QSG7701（pcDNA-X/QSG7701）中DNMT3A