肌苷對化學(xué)性缺氧損傷的少突膠質(zhì)細(xì)胞保護(hù)作用的研究.pdf

1、肌苷是一種在體內(nèi)廣泛存在的小分子物質(zhì)，它對多個系統(tǒng)、多種細(xì)胞都存在較好的保護(hù)作用。近年來的有關(guān)肌苷對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的保護(hù)作用的研究提示，肌苷不僅能夠調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的作用、促進(jìn)神經(jīng)元軸突廣泛的生長，還對損傷后的神經(jīng)細(xì)胞的有較好的保護(hù)作用，在體外化學(xué)性缺氧環(huán)境中肌苷可以保護(hù)ROC-1細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)元的活性，在體內(nèi)肌苷治療腦缺血損傷大鼠能夠減少神經(jīng)細(xì)胞的凋亡和死亡、抑制血小板的聚積、磷酸肌醇的降解和鈣離子的形成、減輕腦缺血損傷程度，減小

2、腦梗死的體積、抑制谷氨酸的突觸后效應(yīng)、促進(jìn)大鼠神經(jīng)功能恢復(fù)。盡管如此，但是ROC-1是一種大鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞和C6膠質(zhì)細(xì)胞融合而成的雜交瘤細(xì)胞，同時具有這兩種細(xì)胞的屬性，無法肯定肌苷對少突膠質(zhì)細(xì)胞缺氧損傷后有保護(hù)作用；另外ROC-1是一種不死的瘤細(xì)胞，且沒有區(qū)分不同的分化階段，無法真正體現(xiàn)少突膠質(zhì)細(xì)胞對病理損傷的敏感性；最后，雖然肌苷治療腦缺血模型大鼠能夠減少神經(jīng)細(xì)胞的凋亡、促進(jìn)神經(jīng)功能的恢復(fù)，但肌苷對體內(nèi)缺血缺氧環(huán)境下的少突膠質(zhì)細(xì)胞的保

3、護(hù)作用仍然不清楚。因此，調(diào)查研究肌苷對缺氧環(huán)境下少突膠質(zhì)細(xì)胞的保護(hù)作用有著極其重要的意義。
　　本研究分為三部分，第一部分調(diào)查研究在化學(xué)性缺氧環(huán)境中肌苷是否對分化后的少突膠質(zhì)細(xì)胞有保護(hù)作用；第二部分調(diào)查研究肌苷在化學(xué)性缺氧環(huán)境中是否對具有增殖能力的少突膠質(zhì)前體細(xì)胞有保護(hù)作用；第三部分調(diào)查研究肌苷治療脊髓挫傷模型7天后對大鼠運(yùn)動功能恢復(fù)和臨近壞死區(qū)的少突膠質(zhì)細(xì)胞存活的影響。
　　第一部分實(shí)驗(yàn)通過免疫熒光染色等形態(tài)學(xué)觀察，同時結(jié)

4、TUNEL染色、MTT實(shí)驗(yàn)和ATP檢測實(shí)驗(yàn)來評估肌苷對不同分化階段少突膠質(zhì)細(xì)胞在化學(xué)性缺氧損傷環(huán)境下細(xì)胞存活和活性的影響。
　　結(jié)果表明：采用相同濃度的魚藤酮損傷不同分化階段的少突膠質(zhì)細(xì)胞24h所造成的損傷不相同。因而，要達(dá)到大致相似的損傷程度所使用的魚藤酮濃度也就不同，未成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞的損傷濃度為5μM魚藤酮，成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞的損傷濃度為20μM魚藤酮。在未成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞和成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞大致相似的損傷程度下采用肌苷預(yù)處理受

5、損傷的少突膠質(zhì)細(xì)胞，結(jié)果肌苷能明顯減少未成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞的死亡和凋亡，并且肌苷呈劑量依賴性提高受損的未成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞的活性，但是肌苷只能減少成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞的死亡，不能減少成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞的凋亡，并且10mM肌苷能提高受損成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞的活性。肌苷促進(jìn)分化后少突膠質(zhì)細(xì)胞的存活、提高分化后少突膠質(zhì)細(xì)胞的活性和肌苷減少魚藤酮介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的過亞硝酸鹽、提供ATP有一定的相關(guān)性。對未成熟和成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞的保護(hù)效果的差異可能與這兩個階段少

6、突膠質(zhì)細(xì)胞上的腺苷受體的表達(dá)差異有關(guān)。
　　第二部分實(shí)驗(yàn)通過免疫熒光染色等形態(tài)學(xué)觀察，同時結(jié)合MTT實(shí)驗(yàn)來評估肌苷對少突膠質(zhì)前體細(xì)胞在化學(xué)性缺氧損傷環(huán)境下細(xì)胞存活和活性的影響。
　　結(jié)果表明：20μM魚藤酮能夠明顯地誘導(dǎo)OPCs的死亡、細(xì)胞活性和細(xì)胞總數(shù)下降，阻止NG2抗原的表達(dá)，但并沒有誘導(dǎo)OPCs的凋亡，10mM肌苷預(yù)處理魚藤酮損傷的OPCs并不能夠減少魚藤酮所誘導(dǎo)的OPCs的死亡和活性下降，卻能提高受損細(xì)胞上NG2抗原

7、的表達(dá)。除此之外，值得注意的是10mM肌苷能夠顯著降低正常培養(yǎng)的OPCs（也就是空白對照組的OPCs）的活性。
　　第三部分實(shí)驗(yàn)通過行為學(xué)和免疫組織化學(xué)來觀察大鼠腹腔注射肌苷對脊髓挫傷模型大鼠運(yùn)動功能恢復(fù)和臨近壞死區(qū)的少突膠質(zhì)細(xì)胞存活數(shù)目的影響。
　　結(jié)果表明：給脊髓挫傷大鼠模型腹腔注射肌苷（75mg/kg，每8h一次）治療對大鼠的運(yùn)動功能和臨近壞死區(qū)的少突膠質(zhì)細(xì)胞存活數(shù)目并沒有改善作用。
　　在體外實(shí)驗(yàn)中我們確實(shí)觀察

8、到肌苷能明顯促進(jìn)化學(xué)性缺氧損傷的未成熟和成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞的存活和活性的提高。對分化后的少突膠質(zhì)細(xì)胞的保護(hù)機(jī)制和肌苷所提供的ATP、肌苷清除過亞硝酸鹽具有一定的相關(guān)性。對化學(xué)性缺氧損傷的少突膠質(zhì)前體細(xì)胞的存活和活性的提高沒有改善作用。同時在用肌苷治療脊髓挫傷大鼠模型時也沒有觀察到損傷區(qū)周邊的少突膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)目增加和大鼠運(yùn)動功能恢復(fù)，可能的原因是：脊髓損傷后的給藥劑量、給藥途徑、給藥時間和觀察時間長度可能對肌苷治療脊髓損傷大鼠的療效的存在著