腓骨肌萎縮癥PMP22、CX32、MFN2基因突變檢測(cè)及CX32功能研究.pdf

1、背景及目的:
　　 腓骨肌萎縮癥（Charcot-Marie-Tooth disease，CMT），又稱遺傳性運(yùn)動(dòng)感覺(jué)性神經(jīng)病(Hereditary motorsensory neuropathy，HMSN)，是一組最常見(jiàn)周?chē)曰蜻z傳病。CMT1型約占CMT總數(shù)的50％，其中以PMP22基因大片段串聯(lián)重復(fù)突變所致CMT1A最常見(jiàn)，占CMT1型的70％。CMT2型主要遺傳方式為常染色體顯性遺傳，占CMT的20％～40％左右，其中

2、最常見(jiàn)類型為MFN2基因突變導(dǎo)致的CMT2A型，約占CMT2型的8％～33.3％。CMTX型在所有CMT型患者中所占比例約為10％～15％，CMTX中最常見(jiàn)的為顯性遺傳CMTX，即CMTX1型，由CX32基因突變導(dǎo)致，占了CMTX型中近90％。至今CMT已50個(gè)位點(diǎn)及30多個(gè)基因被定位，研究發(fā)現(xiàn)CMT并不具有很好的基因-表型相關(guān)性，即使是同一家系內(nèi)同一基因突變導(dǎo)致的不同患者臨床表現(xiàn)均不完全一致。在CMT疾病診斷方面，系統(tǒng)、方便有效的基因

3、診斷流程的建立非常必要。本課題針對(duì)CMT最常見(jiàn)致病基因PMP2、CX32、MFN2展開(kāi)突變篩查工作，同時(shí)構(gòu)建CX32(c.65G＞A)質(zhì)粒驗(yàn)證點(diǎn)突變對(duì)CX32功能表達(dá)的影響。
　　 方法:
　　 1.利用擴(kuò)增3.6kb大小包含1.7kb交換熱點(diǎn)區(qū)域的PMP22基因重復(fù)特異REP連接片段的PCR-雙酶切方法檢測(cè)70例先證者。
　　 2.取34例通過(guò)等位基因特異性PCR及實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)排除PMP22大片段重復(fù)

4、突變、無(wú)男傳男遺傳方式的先證者行CX32基因PCR-直接測(cè)序篩查檢測(cè)。
　　 3.取23例臨床表現(xiàn)、電生理或病理活檢結(jié)果符合CMT2型診斷標(biāo)準(zhǔn)的患者行MFN2基因PCR-直接測(cè)序篩查檢測(cè)。
　　 4.構(gòu)建CX32(c.65G＞A)的pEGFP-N1-wtCX32及pEGFP-N1-mtCX32質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染入Hela細(xì)胞初步研究CX32功能表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.篩查出1例PMP22大片段重復(fù)突變陽(yáng)性

5、家系，1例PMP22大片段缺失突變家系。
　　 2.篩查出6個(gè)CMT家系中發(fā)現(xiàn)5個(gè)CX32基因突變:c.37G＞A、c.65G＞A、c.246C＞G、c.256A＞G和c.533A＞G。其中c.246C＞G和c.533A＞G暫未見(jiàn)報(bào)道。CMT患者中CX32基因突變率為9％。
　　 3.篩查出MFN2基因兩雜合突變位點(diǎn)c.280C＞T及c.395G＞A。其中c.395G＞A暫未見(jiàn)報(bào)道。CMT2型患者中MFN2基因突變率為8

6、％。
　　 4.成功構(gòu)建 CX32(c.65G＞A)的 pEGFP-N1-wtCX32及pEGFP-N1-mtCX32質(zhì)粒，并瞬時(shí)轉(zhuǎn)染入Hela細(xì)胞。
　　 結(jié)論:
　　 1.PMP22基因重復(fù)特異REP連接片段的PCR-雙酶切方法作為一線篩查PMP22基因大片段突變有待考究。
　　 2.CX32及MFN2基因可通過(guò)PCR-直接測(cè)序法行基因突變篩查，本研究篩查此兩基因突變率與國(guó)外報(bào)道一致。其中CX32基因