食管癌組織中Cx32、RASSF1A和SFRPs基因異常甲基化檢測(cè)及臨床意義.pdf

1、目的：食管癌是世界上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，對(duì)于其病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。全世界每年約有30萬(wàn)人死于食管癌，其中有50％在我國(guó)，嚴(yán)重危害著人類健康。研究證明也是一個(gè)多基因變異累積的復(fù)雜過(guò)程其中涉及多種癌基因和抑癌基因的異常。因而，食管癌相關(guān)基因甲基化的分子生物學(xué)的研究為食管癌診斷、臨床治療以及預(yù)防提供了嶄新的途徑。
　　 Ras相關(guān)結(jié)構(gòu)域家族1A基因，是位于位于染色體的3p21.3上，作為Ras下游效應(yīng)分子的一類，起著十分關(guān)鍵

2、的作用。RASSF1A來(lái)調(diào)控促凋亡信號(hào)信號(hào)的傳遞過(guò)程，又是由于在其抑制細(xì)胞內(nèi)特殊的周期蛋白的作用，從而使得細(xì)胞的分裂停止在G1/S期，在阻滯細(xì)胞周期的進(jìn)程中的分化周期，調(diào)控蛋白受到抑制阻礙后期復(fù)合物的形成，有絲分裂時(shí)間紊亂滯后，在細(xì)胞周期的穩(wěn)定性中也發(fā)揮了作用。Cx32(Connexin32)基因是編碼連接蛋白的一種，它屬于一類重要的膜蛋白，對(duì)于維持細(xì)胞間的信息交換以及信息傳遞起到了重要的作用。在維持細(xì)胞重要的功能方面尤其生長(zhǎng)、增殖、分

3、化，細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定作用明顯，國(guó)內(nèi)外的研究越來(lái)越受到重視。分泌型卷曲相關(guān)蛋白(SFRP)非常具有代表性，定位與染色體8p12～11.1的一種分泌型糖蛋白家族，由SFRP基因所編碼，含有300個(gè)氨基酸殘基，含有同源半胱氨酸富含域(CRD)的N-末端和一個(gè)C-末端這樣的特殊區(qū)域。SFRPs基因的的甲基化使得抑癌基因的作用不能發(fā)揮，細(xì)胞內(nèi)的Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路異常激活，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中表現(xiàn)出促進(jìn)作用。它們同屬于一個(gè)信號(hào)通路的不同階段。在維持內(nèi)

4、環(huán)境的穩(wěn)定的作用有重要作用。
　　 方法：
　　 1、材料：選自河北醫(yī)科大學(xué)第四臨床醫(yī)院病理科2009年1月～2010年7月間住院手術(shù)切除的原發(fā)性ESCC新鮮組織60例，所有病例術(shù)前均未接受過(guò)任何治療，并有完整的臨床隨訪資料。對(duì)照組15例選自同一時(shí)期同一病人的食管癌旁正常組織。
　　 2、手術(shù)切除新鮮組織DNA的提?。翰捎肬NIQ-10柱式臨床樣品基因組DNA抽提試劑盒（上海生工）提取基因組DNA。
　　

5、 3、甲基化特異性PCR分析：應(yīng)用甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-MSP)技術(shù)擴(kuò)增目的基因，檢測(cè)食管癌組和對(duì)照組的Cx32、RASSF1A和SFRPs基因甲基化頻率分布情況。x2檢驗(yàn)法檢測(cè)甲基化率增高的臨床病理特征。
　　 4、運(yùn)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS19.0對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果：
　　 1、食管癌組、癌旁組RASSF1A基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化率分別為56.7％(34/60)，13.3％(2/

6、15)。各臨床項(xiàng)目的RASSF1A基因甲基化比例經(jīng)統(tǒng)計(jì)工具分析結(jié)果得到：基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化是食管鱗癌頻發(fā)的分子事件。食管鱗癌組織基因甲基化明顯高于癌旁正常組織。年齡≥55歲和高分化食管鱗癌組織甲基化陽(yáng)性率明顯升高所占比例明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2、食管癌組、癌旁組Cx32基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化率分別為60.0％(36/60)20.0％(3/15)。食管癌組的甲基化率顯著高于癌旁組，對(duì)于Connexin32（縫隙連接蛋

7、白）在食管惡性腫瘤中作用明顯，作為食管癌高危因素。各臨床項(xiàng)目的Cx32基因甲基化比例經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3、測(cè)定SFRPs60例食管癌組織及15例癌旁組織中基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化。SFRP1基因甲基化率分別為61.8％(37/60)，13.3％(2/15)食管癌組織的甲基化發(fā)生率顯著高于癌旁正常組。SFRP2基因在食管癌組織中的甲基化率66.9％(39/60)顯著高于癌旁正常組織13.3％(2/15)。SF

8、RP4基因在食管癌和癌旁正常組織之間的甲基化率分別為66.7％(39/60)，20％(3/15)食管癌組織中的甲基化率顯著高于癌旁正常組織。SFRP5基因在食管癌和癌旁正常組織中的甲基化發(fā)生率分別為64.3％，38/60）和26.7％(4/15)，食管癌組織中的甲基化率顯著高于癌旁正常組織，差異明顯有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：
　　 1、在研究所涉及的人群中，基因Cx32、RASSF1A和SFRPs甲基化成為惡性腫瘤的高

9、危分子頻率事件，使得食管癌發(fā)生頻率增加，基因甲基化與食管癌相關(guān)性增加。
　　 2、Cx32、RASSF1A和SFRPs基因甲基化與ESCC的分化程度顯著相關(guān)。
　　 3、Cx32、RASSF1A和SFRPs基因甲基化與ESCC患者的臨床分期有顯著相關(guān)性，基因的甲基化可能促進(jìn)腫瘤的發(fā)生與進(jìn)展。
　　 4、在研究進(jìn)程中，基因甲基化已經(jīng)和惡性腫瘤的發(fā)生與進(jìn)展關(guān)系密切。隨著研究的不斷深入，為去甲基化提供了一個(gè)前提，可以作