紫草素對Cx32組成的宮頸癌Hela細胞縫隙連接功能的影響.pdf

1、目的：在轉(zhuǎn)染并穩(wěn)定表達縫隙連接蛋白Cx32的宮頸癌Hela細胞上，觀察紫草素對縫隙連接GJ功能和縫隙連接蛋白Cx32的表達水平的影響，以及對順鉑細胞毒性作用的影響。
　　方法：采用實時熒光定量PCR法和蛋白免疫印跡法對轉(zhuǎn)染并穩(wěn)定表達Cx32的Hela細胞系進行驗證；CCK-8法測定用于研究GJ功能作用的紫草素濃度；用細胞接種熒光示蹤法（Parachute assay）觀察不同濃度紫草素對GJ功能的影響；用蛋白免疫印跡（Wester

2、n-blot）法研究紫草素對縫隙連接蛋白Cx32的蛋白表達的影響。用標準集落形成法（standard colony-forming assay）測定紫草素對順鉑細胞毒性的影響。
　　結(jié)果：用多西環(huán)素培養(yǎng)的細胞有Cx32擴增，也有Cx32的表達，沒有用多西環(huán)素的細胞沒有Cx32擴增，也沒有Cx32的表達；對于不用多西環(huán)素誘導(dǎo)的細胞，即無Cx表達時，紫草素4μM濃度以下對Hela細胞無毒性作用；用多西環(huán)素誘導(dǎo)的細胞，紫草素3μM濃度以

3、下對Hela細胞無毒性作用；紫草素處理組細胞間熒光傳遞量在1-3μM隨濃度的增加而增加；紫草素在（1-3μM）能濃度依賴性增強GJ功能及Cx32的表達。在有GJ形成時，3μM紫草素可以增強順鉑降低細胞集落形成率的作用。
　　結(jié)論：驗證Cx32質(zhì)粒轉(zhuǎn)染成功，構(gòu)建了可調(diào)控表達Cx32的細胞系。紫草素能增強Cx32組成的GJ功能。紫草素對GJ功能的增強作用與Cx32的表達有關(guān)。在有GJ形成的Hela細胞（生長融合），3μM紫草素可以增強