大麥黃矮病毒群體的分子變異.pdf

1、大麥黃矮病毒(Barleyyellowdwarfviruses，BYDVs)是引起我國麥類病毒病的主要病毒之一，可造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。由于中國小麥種植區(qū)域的生態(tài)地理環(huán)境有很大差異，可能造成BYDVs含有較為豐富的變異類型。本試驗以我國不同地區(qū)的大麥黃矮病株標(biāo)樣為材料，對其進(jìn)行分子鑒定，明確不同地區(qū)分離物的病毒種類(株系)、分子變異和進(jìn)化關(guān)系。 2004年和2005年共采集BYDVs標(biāo)樣279個，提取總RNA經(jīng)RT-PCR擴(kuò)增CP基

2、因以及核酸點(diǎn)雜交檢測我國近兩年的大麥黃矮病發(fā)生情況，標(biāo)樣的70％左右為陽性結(jié)果，其中，BYDV-GAV占據(jù)了陽性樣品的大部分比例，BYDV-PAV、BYDV-GPV分別在特定區(qū)域優(yōu)勢地發(fā)生，如2005年BYDV-PAV主要集中在陜西渭南和楊陵地區(qū)，占當(dāng)?shù)仃栃詷悠返?9.41％，比2004年的7％有明顯的增多。BYDV-GPV,作為中國特有的大麥黃矮病毒株系，在田間的檢測樣品中比較少，多發(fā)生在山西運(yùn)城，2005年陜西渭南、陜西鳳翔、甘肅甘

3、谷各檢測到一例。 RT-PCR產(chǎn)物經(jīng)克隆測序，進(jìn)行多序列比對分析不同病毒(株系)的分子變異情況。測序的26個BYDV-GAV核苷酸序列長度為600bp，序列一致程度高，變異程度非常小。根據(jù)序列構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹具有許多平行分支，表明BYDV-GAV序列之間沒有明顯的聚類。BYDV-PAV核苷酸序列的分子變異則與BYDV-GAV結(jié)果不同，600個堿基中有179個位點(diǎn)發(fā)生變異，尤其表現(xiàn)在3’末端。系統(tǒng)進(jìn)化樹形成四個組(A-D)。A、B

4、、C三組同屬于PAV-CN分離物，雖從同一進(jìn)化分支而來，但其各自序列相互間差異程度較大，進(jìn)而分別聚類成組。BYDV-GPVCP基因核苷酸序列長度為606bp，測得序列間同源性為98.7％-99.8％，變異很小。 在測得的BYDV-PAV序列中，來自甘肅省甘谷的05GG2標(biāo)樣比較特殊，它與PAV-CN核苷酸差異較大，而與國外PAV分離物相似程度較高，根據(jù)已公布的BYDV-PAV分離物全基因組序列設(shè)計保守引物，擴(kuò)增出05GG2除末端