抵抗素在糖尿病和冠心病中的作用及其可能的分子機制.pdf

1、抵抗素是一種新近發(fā)現(xiàn)的富含半胱氨酸的脂肪內(nèi)分泌因子，在嚙齒類動物，抵抗素可以引起胰島素抵抗，與肥胖和糖尿病等有明顯的相關(guān)性，但人類抵抗素在這些疾病中的作用尚不明確。本研究旨在觀察糖尿病，糖尿病合并冠心病及冠心病不同類型之間的血清抵抗素水平，明確其在此類疾病中的作用。并在此基礎(chǔ)上，對抵抗素在細胞內(nèi)可能的作用靶點進行初步探討。 材料和方法: 1.研究對象 在2型糖尿病(T2DM)、T2DM合并冠心病(CAD)與抵抗素

2、的關(guān)系研究中，取T2DM患者40例、T2DM合并CAD患者38例、健康對照組34例。而在觀察不同類型冠心病患者血清抵抗素水平的變化時，26例健康人群和65例冠心病患者入選，其中急性心肌梗死(AMD 24例、不穩(wěn)定性心絞痛(UAP)19例、穩(wěn)定性心絞痛(SAP)22例。 2.材料和方法酶聯(lián)免疫吸附法測定血清抵抗素水平，白細胞計數(shù)(WBC)；超敏C反應(yīng)蛋白(hsCRP)；心肌肌酸激酶(CK)；心肌肌酸激酶同工酶(CK-MB)；肌鈣蛋

3、白(cTnI)等用常規(guī)實驗方法測定。 構(gòu)建真核表達載體pSecTag2B-RETN，pSeclRP-LUC，pSec-LUC，pSecO-LUC質(zhì)粒。pSecTag2B-RETN質(zhì)粒穩(wěn)定轉(zhuǎn)染L02細胞，用Western blowing檢測抵抗素融合蛋白的表達。免疫熒光明確抵抗素在細胞中的定位。把含熒光素酶報告基因的質(zhì)粒pSecIRP-LUC，pSec-LUC，pSecO-LUC瞬時轉(zhuǎn)染HepG2細胞，重組人抵抗素處理后，測定熒光

4、素酶的活性。觀察抵抗素對胰島素受體表達的調(diào)控作用。 結(jié)果: 1.抵抗素與T2DM、T2DM合并CADT2DM和T2DM合并CAD組血清抵抗素水平均明顯高于對照組；T2DM合并CAD組血清抵抗素比T2DM組高。 2.抵抗素與AMI、UAP和SAPAMI、UAP和SAP各組血清抵抗素水平與對照組相比均明顯增高(P<0.05)。另外，AMI組中血清抵抗素水平高于UAP和SAP組。同時發(fā)現(xiàn)UAP和SAP組之間存在著明顯的

5、統(tǒng)計學(xué)差異。在AMI組，血清抵抗素水平與WBC、hsCRP和CKmax、CK-MBmax、cTnImax正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)分別為0.412、0.427、0.731、0.678、0.656)。 3.抵抗素在細胞中的定位和對胰島素受體表達的調(diào)控經(jīng)Western blot證實，抵抗素融合蛋白表達成功。免疫熒光激光共聚焦顯微鏡觀察，綠色熒光集中在細胞核，提示抵抗素的作用靶點可能在細胞核。含胰島素受體啟動子的報告基因質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2細胞，

6、重組抵抗素蛋白處理后熒光素酶活性與處理前相比無顯著性差異。 結(jié)論: 1.T2DM、T2DM合并CAD患者血清抵抗素明顯增高，推測抵抗素可能參與了胰島素抵抗及動脈粥樣硬化的進程。 2.血清抵抗素水平與心肌損害大小及炎癥標(biāo)志物有關(guān)，隨著病情的進展、心肌損害的加重，血清抵抗素水平呈增高趨勢，提示血清抵抗素可能作為炎癥因子參與了動脈粥樣硬化和急性心肌梗死的發(fā)生、發(fā)展。 3.抵抗素在細胞水平的定位研究，發(fā)現(xiàn)抵抗素蛋