miR-107通過下調(diào)SALL4的表達(dá)誘導(dǎo)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、腦膠質(zhì)瘤是最常見的惡性腫瘤,至今其分子機制仍不是很清楚。為了闡明導(dǎo)致腦膠質(zhì)瘤發(fā)生的信號通路,本論文應(yīng)用MTT分析結(jié)果顯示miR-107表達(dá)下調(diào)后促進(jìn)了腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞MO59K的增殖,應(yīng)用qRT-PCR和Westernblot技術(shù),顯示miR-107過表達(dá)后在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞SHG44、U251和U87中,FADD的表達(dá)水平明顯上調(diào)。進(jìn)而通過Caspase8活性分析顯示,miR-107表達(dá)上調(diào)后Caspase8的活性顯著增加。我們進(jìn)一步通過反向

2、實驗證明在SHG44細(xì)胞中低表達(dá)的FADD回復(fù)了miR-107過表達(dá)的SHG44細(xì)胞中引起的Caspase8活性增加的效應(yīng),提示miR-107通過FADD誘導(dǎo)了腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的凋亡通路,抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖。
　　為了驗證miR-107的下游靶分子,我們通過免疫熒光技術(shù)表明miR-107過表達(dá)后抑制了SHG44細(xì)胞中SALL4的表達(dá),而且低表達(dá)的miR-107促進(jìn)了MO59K細(xì)胞中SALL4的表達(dá)。進(jìn)一步應(yīng)用雙熒光素酶報告系統(tǒng),通

3、過miR-107與SALL4結(jié)合位點的定點突變,證明在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞SHG44、U251和U87中,miR-107的表達(dá)上調(diào)抑制了帶有SALL43'UTR序列的螢火蟲熒光素酶的活性,在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞MO59K中,miR-107表達(dá)下調(diào)則增加了SALL43'UTR螢火蟲熒光素酶的活性,表明miR-107的5'端種子區(qū)是結(jié)合SALL4的關(guān)鍵位點。
　　為了探討原癌基因SALL4的功能,我們通過SALL4的RNAi干擾實驗證明SALL4表達(dá)

4、下調(diào)后,明顯抑制SHG44細(xì)胞的增殖,通過PI和AnnexiV雙染實驗、qRT-PCR、Westernblot、Caspase8及Caspase3/7的活性分析實驗,證明SALL4的表達(dá)下調(diào)通過FADD誘導(dǎo)了腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的凋亡,從而抑制了腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖。為了闡明SALL4在miR-107誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡過程中的作用,我們進(jìn)行了與SALL4過表達(dá)相關(guān)的miR-107的反向恢復(fù)實驗,結(jié)果表明,SALL4過表達(dá)后部分消減了miR-107過表