調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞在ITP發(fā)病中的意義及機(jī)制研究.pdf

1、原發(fā)性免疫性血小板減少癥(primaryimmunethrombocytopenia,ITP)是臨床最為常見的出血性疾病，約占出血性疾病總數(shù)的30％。ITP臨床表現(xiàn)為皮膚粘膜出血、月經(jīng)過多、內(nèi)臟出血、甚至顱內(nèi)出血，嚴(yán)重影響人類健康。其發(fā)病機(jī)制主要為機(jī)體自身免疫耐受失衡，產(chǎn)生了針對血小板糖蛋白(glycoprotein，GP)的自身抗體，大部分為主要針對GPⅡb/Ⅲa和/或GPIb/IX的IgG，該抗體與血小板膜自身GP抗原結(jié)合，導(dǎo)致血小

2、板被單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)吞噬破壞。免疫反應(yīng)異常的機(jī)制包括抗原遞呈細(xì)胞、T細(xì)胞和B細(xì)胞之間復(fù)雜的相互作用。如Th1/Th2細(xì)胞亞群失衡，血小板特異性自身反應(yīng)性T細(xì)胞和B細(xì)胞的活化，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量的減少或抑制功能受損，以及細(xì)胞毒性T細(xì)胞對血小板的破壞。但是，對血小板自身抗原免疫耐受的破壞及自身抗體產(chǎn)生的機(jī)制尚不明確。
　　 研究證實，在健康成年個體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)具有潛在自身反應(yīng)活性的T細(xì)胞，這些自身反應(yīng)性T細(xì)胞可通過誘導(dǎo)調(diào)亡及免疫無能等多種

3、機(jī)制來維持自身免疫耐受狀態(tài)。而在這一過程中，免疫調(diào)節(jié)酶吲哚胺2，3-雙加氧酶(indoleamine2，3-dioxygenase，IDO)及具有免疫調(diào)節(jié)功能的樹突狀細(xì)胞(dendriticcells，DCs)起了非常重要的作用。
　　 IDO是肝臟外唯一可催化色氨酸(Try)分子中吲哚環(huán)氧化裂解，從而沿犬尿酸(Kyn)途徑分解代謝的限速酶。IDO特異性地表達(dá)在巨噬細(xì)胞和DCs上。IDO可通過降解局部組織中的色氨酸，影響淋巴細(xì)胞

4、的功能。近年來研究發(fā)現(xiàn)，在許多自身免疫性疾病中存在著IDO介導(dǎo)的色氨酸分解代謝作用的異常，如多發(fā)性硬化癥、自身免疫性糖尿病、彌漫性毒性甲狀腺腫、以及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等。
　　 DCs是目前已知體內(nèi)最重要的抗原遞呈細(xì)胞，而且也是唯一能激活初始型T細(xì)胞的抗原遞呈細(xì)胞，在誘導(dǎo)免疫應(yīng)答中具有獨(dú)特的地位。近年的研究表明，DCs不僅參與對外來抗原的免疫反應(yīng)，而且參與了對自身抗原的免疫耐受。最近研究證明，DCs的免疫調(diào)節(jié)功能與其表達(dá)功能性IDO

5、密切相關(guān)。
　　 研究發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)性DCs表達(dá)高水平的功能性IDO。在自身免疫性疾病中，表達(dá)高水平功能性IDO的DCs能夠誘導(dǎo)自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞凋亡和活化調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，這是維持外周免疫耐受的重要機(jī)制。調(diào)節(jié)性DCs的免疫調(diào)節(jié)功能除了與IDO在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)水平有關(guān)外，還與IDO的酶活性密切相關(guān)。IDO的表達(dá)可由免疫炎性介質(zhì)如IFNγ、IFNα和TNF等所誘導(dǎo)。B7-1/B7-2分子與CTLA-4/CD28的結(jié)合是啟動樹突狀細(xì)胞IDO酶活

6、性的必要條件，當(dāng)這種結(jié)合斷開時，IDO處于無活性狀態(tài)。另有研究發(fā)現(xiàn)，可溶性CTLA-4可誘導(dǎo)人成熟DCs表達(dá)具有酶活性的IDO，重組人CTLA-4-IgFc融合蛋白，與共刺激分子B7-1、B7-2具有高度親和力，亦可誘導(dǎo)功能性IDO在樹突狀細(xì)胞的表達(dá)，使T細(xì)胞微環(huán)境色氨酸缺乏，犬尿氨酸積累，從而抑制T細(xì)胞的增殖和促進(jìn)淋巴細(xì)胞的凋亡。除此之外，經(jīng)CTLA-4-Ig誘導(dǎo)的表達(dá)酶活性IDO的樹突狀細(xì)胞還可以促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulator

7、yT-cells，Tregs)的生成，進(jìn)而抑制效應(yīng)性T細(xì)胞活性，誘導(dǎo)免疫耐受。在我們以前的研究中也發(fā)現(xiàn)，CTLA-4-Ig在體外能夠以細(xì)胞依賴性方式誘導(dǎo)ITP患者自身反應(yīng)性T細(xì)胞產(chǎn)生特異性免疫耐受。以上研究內(nèi)容為我們應(yīng)用CTLA-4-Ig誘導(dǎo)DCs治療免疫性血小板減少癥提供了重要依據(jù)。
　　 目的:
　　 檢測ITP患者體內(nèi)IDO表達(dá)，并利用CTLA-4-Ig體外誘導(dǎo)ITP患者外周血樹突細(xì)胞表達(dá)具有酶活性的IDO，檢測I

8、DO表達(dá)及活性變化。通過檢測IDO+DCs對T細(xì)胞增殖、活化、凋亡以及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響，研究IDO+DC的致免疫耐受作用。
　　 方法:
　　 ◆選擇ITP患者15例，包括5位初診ITP患者和10位復(fù)發(fā)ITP患者。正常對照來自于12例健康志愿者。分離外周血中單個核細(xì)胞和血小板。
　　 ◆將單個核細(xì)胞加入細(xì)胞因子培養(yǎng)7天，培養(yǎng)后的未成熟DCs用不同的細(xì)胞因子培養(yǎng)2天。將培養(yǎng)后的成熟DCs分為2組:組1為加入CTL

9、A-4-Ig(10μg/ml)培養(yǎng)者;組2為未加入CTLA-4-Ig(0μg/ml)培養(yǎng)者。
　　 ◆實時定量聚合酶鏈反應(yīng)(real-timepolymerasechainreaction，RT-PCR)檢測IDOmRNA的表達(dá)，流式細(xì)胞術(shù)PBMCs和成熟DCs中IDO的表達(dá)率，蛋白印跡法(Westernboltting)檢測IDO的表達(dá)。高效液相色譜法(highperformanceliquidchromatography,H

10、PLC)檢測ITP患者和正常對照色氨酸(Trp)及其特異代謝產(chǎn)物犬尿氨酸(Kyn)的濃度。將誘導(dǎo)后的兩組DCs分別與患者血小板特異性T淋巴細(xì)胞組成混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)體系，檢測體系中T淋巴細(xì)胞增殖率，流式細(xì)胞術(shù)檢測T淋巴細(xì)胞增殖、活化、凋亡情況及Treg細(xì)胞的比例。
　　 結(jié)果:
　　 ◆ITP患者DCs中的IDO表達(dá)
　　 與正常對照組相比，IDO的平均熒光強(qiáng)度(MFI)在ITP患者DCs中顯著減少（37

11、6.9±28.00vs124±23.10;P＜0.01）
　　 ◆CTLA-4-Ig對ITP患者DCs中IDO的表達(dá)和活性的影響
　　 組1（培養(yǎng)液中加入CTLA-4-Ig，濃度10μg/ml）與組2（培養(yǎng)液中不加CTLA-4-Ig，即0μg/ml）。組1中IDOmRNA的相對表達(dá)量是組2的36.8倍(p=0.0004)。WesternBlotting和流式細(xì)胞分析也證實了組1的DCs中IDO的表達(dá)量比組2的要明顯的高(

12、401.0±44.9vs124.0±23.1;P＜0.0001)。
　　 HPLC法測定了DCs培養(yǎng)上清液中犬尿氨酸的濃度，組1中的犬尿氨酸顯著高于組2(0.86±0.08uMvs0.39±0.03uM;P=0.0179)。而加入IDO特異性抑制劑1-MT后，其上清液中的犬尿氨酸濃度明顯降低(0.86±0.08uMvs0.19±0.05uM;P=0.0108)。
　　 ◆CTLA-4-Ig誘導(dǎo)DCs功能性IDO高表達(dá)的致

13、免疫耐受作用
　　 a)IDO+DCs對T細(xì)胞增殖的抑制作用:經(jīng)CTLA-4-Ig誘導(dǎo)后的IDO+DCs比未經(jīng)CTLA-4-Ig誘導(dǎo)的DCs明顯抑制了血小板特異性T細(xì)胞的增殖(0.43-0.10vs0.65±0.06;P＜0.0001);然而，當(dāng)加入1-MT阻斷IDO活性后，CTLA-4-Ig誘導(dǎo)后的IDO+DCs對血小板特異性T細(xì)胞增殖的抑制作用明顯降低(0.74±0.04vs0.43±0.10;P＜0.0001)
　　

14、 b)IDO+DCs對T細(xì)胞活化的抑制作用:流式細(xì)胞術(shù)檢測了T細(xì)胞表面活化標(biāo)志CD25，CD69和CD71在T細(xì)胞上的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)組1中CD3+/CD25+細(xì)胞、CD3+/CD69+和CD3+/CD71+細(xì)胞的比例為22.7％±4.1％，8.0％±6.5％和24.4％±10.4％，在組2中的比例分別為31.0％±4.7％,15.0％±11.0％,32.0％±12.5％。
　　 c)IDO+DCs對淋巴細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用:流式細(xì)胞

15、術(shù)檢測到與組2相比，組1中的淋巴細(xì)胞凋亡明顯增加。組1中CD4+細(xì)胞、CD8+細(xì)胞和CD19+細(xì)胞上的AnnexinV％分別為21.8％±7.8％，10.7％±3.1％和18.9％±9.9％，組2分別為13.8％±6.1％，7.8±2.9％，13.3％±9.3％，明顯高于組2。
　　 d)IDO+DCs可誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)的生成:檢測CD4+CD25+Foxp3+(Treg)細(xì)胞的比例得出組1中Treg細(xì)胞的比例明顯高

16、于組2(5.8％±1.7％vs2.7％±0.9％;P=0.0001)。
　　 結(jié)論:
　　 ◆ITP患者DCs中的IDO表達(dá)降低。
　　 ◆CTLA-4-Ig增強(qiáng)ITP患者DCs中功能性IDO的表達(dá)。
　　 CTLA-4-Ig誘導(dǎo)樹突細(xì)胞IDO高表達(dá)致免疫耐受:IDO+DCs抑制T細(xì)胞增殖;抑制T細(xì)胞活化;促進(jìn)淋巴細(xì)胞凋亡的促進(jìn);誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)的生成。
　　 意義:
　　 I

17、TP患者IDO的表達(dá)及酶活性均存在異常，IDO介導(dǎo)的色氨酸分解代謝受損是ITP重要發(fā)病機(jī)制之一.CTLA-4-Ig可以提高ITP患者DCs功能性IDO的表達(dá)，抑制T細(xì)胞的增殖與活化，促進(jìn)淋巴細(xì)胞凋亡，提高Treg細(xì)胞比例，且以上作用為IDO依賴性。IDO介導(dǎo)的色氨酸分解代謝可能在ITP發(fā)病中起重要作用，并為ITP的治療提供了新途徑。
　　 第二部分：TLR7/BAFF/BAFF受體信號通路在ITP中作用的體內(nèi)研究
　　

18、原發(fā)性免疫性血小板減少癥(primaryimmunethrombocytopenia，ITP)是由于機(jī)體免疫失耐受，產(chǎn)生的抗血小板自身抗體與血小板表面特異性抗原結(jié)合，導(dǎo)致血小板在網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)過度破壞引起血小板減少。此外，多種細(xì)胞免疫機(jī)制異常，如Th1極化、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)目降低或者抑制功能缺陷、細(xì)胞毒性T細(xì)胞(cytotoxicTlymphocyte，CTL)介導(dǎo)的血小板破壞等在ITP的發(fā)病中發(fā)揮重要作用。到目前為止，出現(xiàn)上述異常的原因尚

19、未明確。
　　 目前有關(guān)ITP的實驗研究多為臨床試驗和藥物治療等方面，沒有理想的動物模型，導(dǎo)致許多體外試驗總結(jié)的結(jié)論不能在體內(nèi)試驗得到證實。本實驗用大鼠血小板免疫CBA近交系小鼠，通過輸入抗原誘導(dǎo)模型鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)CBA小鼠外周血中血小板的數(shù)量出現(xiàn)緩慢降低，說明該模型能夠較好的模擬ITP患者體內(nèi)血小板持續(xù)性降低的情況，可為研究ITP的發(fā)病過程提供工具。
　　 近年來，Toll樣受體(Toll-likerecepto

20、rs，TLRs)在介導(dǎo)先天性免疫和獲得性免疫反應(yīng)中的作用日益受到人們的重視。TLRs是由一組結(jié)構(gòu)相似的受體組成的蛋白家族，目前共發(fā)現(xiàn)13種TLRs家族成員，其中TLR1～11表達(dá)于人類，主要分布在包括樹突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞在內(nèi)的免疫細(xì)胞的表面。TLRs是免疫細(xì)胞的激活劑，是先天免疫系統(tǒng)的關(guān)鍵介體，并調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的活性。有證據(jù)表明，TLRs在免疫和炎癥性疾病中發(fā)揮了作用，其中細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的TLR7參于了APC的活化和自身抗體的產(chǎn)生。有研

21、究發(fā)現(xiàn)TLR7與特異性配體結(jié)合后可促進(jìn)B細(xì)胞活化、增殖和病理性抗體的產(chǎn)生，且ITP患者中的TLR7水平升高了，但具體傳導(dǎo)途徑尚在摸索之中。
　　 有研究認(rèn)為，內(nèi)源性共刺激分子參與B細(xì)胞調(diào)節(jié)這一過程，其中B細(xì)胞激活因子(Bcellactivatingfactor,BAFF)是新近發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞共刺激分子。BAFF主要由單個核細(xì)胞如樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞表達(dá)。BAFF共有三種受體:穿膜蛋白活化物（transmernbrane

22、activationandcalcium-modulatorandcyclophilinligandinteractor,TACI）、B細(xì)胞成熟抗原（Bcellmaturationantigen，BCMA)和B細(xì)胞激活因子受體(Bcellactivatingfactor-receptor,BAFF-R)，這三種受體在B細(xì)胞表面均有表達(dá)。BAFF與受體結(jié)合后，通過招募TRAF可激活NF-κB等信號途徑，調(diào)節(jié)下游相關(guān)基因的表達(dá)，從而促進(jìn)B細(xì)

23、胞增殖、活化和自身抗體產(chǎn)生。由此可見，BAFF在調(diào)節(jié)自身免疫性疾病的過程中發(fā)揮重要作用。但I(xiàn)TP患者中BAFF的作用機(jī)制尚未闡明。
　　 綜上，TLRs與BAFF均參與了B細(xì)胞活化和抗體產(chǎn)生的過程，是自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制之一。國內(nèi)外學(xué)者對TLRs和BAFF之間是否存在相互作用展開了研究。有學(xué)者通過體內(nèi)實驗證實，活性氧簇(reactiveoxygenspecies，ROS)通過激活TLRs信號途徑增強(qiáng)小鼠脾臟中BAFF的mRN

24、A和蛋白質(zhì)表達(dá)。
　　 鑒于ITP與TLR7、TLR7與BAFF、BAFF與B細(xì)胞、B細(xì)胞與ITP的散在文獻(xiàn)報道，提示TLR7/BAFF/BAFF受體信號通路可能在ITP的發(fā)病中發(fā)揮重要作用。在本研究中，我們探討了這樣一種假設(shè):APC中的TLR7，影響自身BAFF分泌，并通過與BAFF受體的結(jié)合作用于B細(xì)胞，進(jìn)而影響自身抗體的產(chǎn)生。本研究結(jié)果將TLR7與疾病活動度相關(guān)聯(lián)，闡述了TLR7/BAFF/BAFF受體信號通路在ITP發(fā)病

25、機(jī)制中的作用。
　　 目的：
　　 建立ITP動物模型，并對模型鼠體內(nèi)血小板計數(shù)及表面相關(guān)抗體進(jìn)行檢測。使用建立的ITP小鼠模型及對照組小鼠，檢測它們脾臟單個核細(xì)胞TLR7、BAFF、BAFF受體和血清BAFF的表達(dá);通過TLR7激動劑(imiquimod)和TLR7沉默慢病毒研究TLR7對小鼠血小板計數(shù)的影響、對PAIgG水平的影響、對BAFF水平的影響和對BAFF受體的影響。探討TLR7/BAFF/BAFF受體信號通

26、路在ITP發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　 方法:
　　 ◆用正常Wistar大鼠的血小板免疫CBA小鼠，通過輸入抗原誘導(dǎo)模型鼠產(chǎn)生免疫反應(yīng)。然后通過血液分析儀檢測CBA小鼠外周血中血小板的數(shù)量，通過流式細(xì)胞術(shù)檢測體內(nèi)血小板表面相關(guān)抗體。
　　 ◆采用可表達(dá)GFP的針對鼠TLR7(NM_133211)的慢病毒沉默載體，并通過熒光顯微鏡觀察GFP表達(dá)情況，評估轉(zhuǎn)染效率，并收集RAW264.7細(xì)胞，然后通過實時PCR檢測細(xì)胞

27、中TLR7的mRNA水平，Westernblotting測定細(xì)胞中TLR7的蛋白水平。
　　 ◆將首次免疫三周后，血小板計數(shù)最低時的小鼠作為“ITP小鼠”。ITP小鼠和對照組小鼠分別再分成四組。組1:ITP小鼠給予大鼠血小板注射(n=10)，對照組小鼠給予生理鹽水(n=8);組2:ITP小鼠給予大鼠血小板注射(n=8)，對照組小鼠生理鹽水(n=8)，并分別在小鼠尾部靜脈注射107TU（transductionunit，TU）陰性

28、對照載體;組3:ITP小鼠給予大鼠血小板注射(n=8)，對照組小鼠生理鹽水(n=8)，并分別在小鼠尾部靜脈注射107TU慢病毒沉默載體;組4:ITP小鼠給予大鼠血小板注射(n=8)，對照組小鼠生理鹽水(n=8)，并分別隔日給予25μg咪喹莫特（TLR7激動劑）。
　　 ◆實時定量PCR(realtimequantitativePCR)檢測小鼠TLR7mRNA表達(dá);Westernblotting檢測蛋白濃度;酶聯(lián)免疫吸附實驗(en

29、zyme-linkedimmunoadsorbentassay，ELISA)檢測血清和細(xì)胞上清BAFF水平;通過流式細(xì)胞術(shù)分析平均熒光強(qiáng)度（medianfluorescenceintensity,MFI），檢測PAIgG、BAFF受體表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 ◆模型小鼠的血小板計數(shù)和血小板表面抗體的檢測
　　 與對照組相比，模型組小鼠外周血中血小板從免疫后第1周開始逐漸降低(P＜0.05)，在免疫后第3周降至最

30、低(P＜0.01)，隨后血小板數(shù)量開始慢慢回升。將免疫后第3周小鼠體內(nèi)血小板數(shù)值降至最低時的模型組小鼠作為ITP小鼠進(jìn)行后續(xù)研究。
　　 流式檢測結(jié)果顯示，ITP小鼠PAIgG的平均熒光值為84.15±24.47，而對照組小鼠為41.19±18.14。與對照組相比，ITP小鼠PAIgG的水平顯著增高(P＜0.01)。
　　 ◆小鼠體內(nèi)TLR7、BAFF、BAFF受體的表達(dá)
　　 a小鼠脾臟單個核細(xì)胞中TLR7的表

31、達(dá):與對照組相比，ITP小鼠中TLR7mRNA表達(dá)增加了3.14倍(P=0.003);ITP小鼠TLR7的蛋白水平也顯著增加(p=0.033)。
　　 b小鼠脾臟單個核細(xì)胞和血清中BAFF的表達(dá):
　　 ITP小鼠中SMCs上清液中的BAFF的水平與對照組相比，明顯增加(ITP小鼠:766.09±43.03pg/ml，對照組:519.19±43.95pg/ml，P=0.004)。
　　 試驗小鼠組和對照組的血清B

32、AFF水平在免疫前分別為7015.27±454.33pg/ml和7043.45±435.89pg/ml。兩組間并無明顯差異(P=1)。首次免疫接種三周后，ITP小鼠中的血清BAFF水平相較于免疫前明顯升高(12448.34±695.23pg/mlvs7015.27±454.33pg/ml，P=0.000)。在ITP小鼠(12448.34±695.23pg/ml)和對照組(7920.0±375.15pg/ml)間也存在明顯差異(P=0.0

33、00)。用生理鹽水注射前和3周后，對照組中沒有發(fā)現(xiàn)顯著性差異(P=0.22)。首次免疫接種四周后，相比對照組，ITP小鼠內(nèi)血清BAFF水平明顯增加(ITP小鼠:881.66±211.5pg/ml，對照組小鼠:763.67±198.55pg/ml,P=0.006)。
　　 c小鼠脾臟單個核細(xì)胞中BAFF受體的表達(dá):ITP小鼠中BAFF的三種受體中，與對照組相比，只有BAFF-R是明顯升高的(P=0.006)，并沒有發(fā)現(xiàn)BCMA和T

34、ACI水平的明顯變化。
　　 ◆沉默慢病毒的轉(zhuǎn)染效率的檢測
　　 熒光顯微鏡觀察證實轉(zhuǎn)染三天后超過90％的RAW264.7細(xì)胞被轉(zhuǎn)染，并收集RAW264.7細(xì)胞，檢測細(xì)胞中TLR7mRNA水平顯著下降，相對于對照組僅3.82±0.62％(p=0.000);細(xì)胞中TLR7的蛋白檢測顯示，TLR7沉默慢病毒可以有效地干擾RAW26.7細(xì)胞中TLR7的蛋白表達(dá)(p=0.08)。
　　 ◆TLR7對血小板計數(shù)的影響

35、>　　 TLR7沉默慢病毒明顯增加了相對血小板計數(shù)(1.11±0.12vs0.8±0.09，P=0.025)，而咪喹莫特則明顯降低了ITP小鼠中的相對血小板計數(shù)(0.59±0.05vs0.84±0.09，P=0.034)。但各對照組中沒有發(fā)現(xiàn)明顯的變化。
　　 ◆TLR7對PAIgG水平的影響
　　 首次免疫接種四周后，與對照組相比PAIgG水平在ITP小鼠中顯著增加(27.44±3.68vs3.00±0.43，P=0

36、.002)。咪喹莫特則明顯增加了PAIgG的水平(56.63±13.20，P＜0.001)，而TLR7沉默慢病毒在ITP小鼠中明顯降低了PAIgG水平(9.99±2.78，P=0.026)。在四個對照組中沒有發(fā)現(xiàn)PAIgG水平的明顯差異。
　　 ◆TLR7對BAFF水平的影響
　　 咪喹莫特明顯升高了ITP小鼠中SMCs上清液中的BAFF水平(1145.17±123.70pg/mlvs766.09±43.03pg/ml，

37、P＜0.001)，但對照組中并沒觀察到此類變化;而TLR7沉默慢病毒并沒有明顯改變ITP小鼠組和對照組中BAFF的水平。咪喹莫特明顯升高了ITP小鼠內(nèi)血清BAFF的水平(10578.43±417.54pg/ml，P=0.001)，而TLR7沉默慢病毒降低了ITP小鼠內(nèi)血清BAFF的水平(7258.36±359.17pg/ml，P=0.011);四個對照組的結(jié)果無明顯差異。
　　 ◆TLR7對BAFF受體的影響
　　 流式

38、細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明，對ITP小鼠或?qū)φ战M小鼠中TLR7激發(fā)或抑制后，BAFF-R水平?jīng)]有發(fā)現(xiàn)明顯的差異。
　　 結(jié)論:
　　 ◆試驗建立的ITP小鼠模型不僅能夠模擬ITP發(fā)病過程中血小板減少的情況，而且模型鼠體內(nèi)PAIgG的水平明顯升高。
　　 ◆ITP小鼠中TLR7水平是升高的;BAFF水平升高;BAFF的三種受體中僅有BAFF-R的表達(dá)是升高的。
　　 ◆ITP小鼠中TLR7的活化可能負(fù)調(diào)節(jié)ITP小鼠的血

39、小板數(shù)值，和疾病活動度相關(guān)。
　　 ◆ITP小鼠中TLR7對于PAIgG起到了促進(jìn)作用。
　　 ◆ITP小鼠中TLR7增進(jìn)了BAFF的分泌。
　　 ◆ITP小鼠中ITP小鼠中TLR7和BAFF-R間沒有直接的互相作用。
　　 意義:
　　 ◆試驗建立的ITP小鼠模型，能夠模擬ITP發(fā)病過程中血小板降低的病理過程，為深入研究ITP的發(fā)病機(jī)理提供了良好的動物模型。
　　 ◆TLR7/BAFF/