MiR-221-222抑制自噬參與多發(fā)性骨髓瘤糖皮質(zhì)激素耐藥.pdf

1、目的：研究miR-221/222是否通過調(diào)節(jié)自噬相關(guān)基因ATG4A的表達(dá)抑制自噬，從而介導(dǎo)MM細(xì)胞的糖皮質(zhì)激素耐藥。
　　方法：采用Real time RT-PCR方法對(duì)臨床MM病人以及正常人骨髓CD138+細(xì)胞以及多個(gè)骨髓瘤細(xì)胞系miR-221/222的表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)；采用Real time RT-PCR、Western-blotting分別檢測(cè)在骨髓瘤細(xì)胞系中ATG4A在mRNA與蛋白的表達(dá)水平；使用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法將miR-22

2、1/222mimics轉(zhuǎn)染骨髓瘤細(xì)胞系MM.1S建立miR-221/222過表達(dá)體系后，通過Western-blotting、Real time RT-PCR檢測(cè)過表達(dá)細(xì)胞ATG4A的表達(dá)水平；采用電鏡檢測(cè)自噬泡、Western-blotting檢測(cè)P62蛋白、LC3B-I、LC3B-II蛋白檢測(cè)地塞米松作用下，轉(zhuǎn)染miR-221mimics前后骨髓瘤細(xì)胞自噬水平的的變化；采用CCK-8檢測(cè)骨髓瘤細(xì)胞在加入自噬抑制劑前后地塞米松對(duì)細(xì)胞死

3、亡的影響，以及過表達(dá)miR-221/222和抑制miR-221/222后地塞米松對(duì)細(xì)胞死亡的影響。
　　結(jié)果：在臨床MM病人以及正常人骨髓細(xì)胞CD138+細(xì)胞中，MM病人的miR-221表達(dá)低于正常對(duì)照，miR-222表達(dá)高于正常對(duì)照；在骨髓瘤細(xì)胞系中miR-221/222表達(dá)量與ATG4A mRNA的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)；在MM細(xì)胞中，miR-221/222可在mRNA及蛋白水平抑制ATG4A的表達(dá)；miR-221/222在MM.1S細(xì)

4、胞的基礎(chǔ)表達(dá)低于MM.1R細(xì)胞的表達(dá)，且地塞米松可使地塞米松敏感的MM.1S細(xì)胞的miR-221/222顯著減低而耐藥的MM.1R細(xì)胞系卻少量減低；過表達(dá)miR-221/222可抑制激素敏感的細(xì)胞發(fā)生死亡，而抑制miR-221/222表達(dá)可促進(jìn)激素耐藥的細(xì)胞發(fā)生死亡；地塞米松可引起MM細(xì)胞發(fā)生自噬、且激素敏感細(xì)胞系發(fā)生自噬的水平明顯高于激素耐藥的細(xì)胞系。抑制自噬可以減少地塞米松誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡，而miR-221/222可抑制自噬的發(fā)生。<