P15、P16、HIC-1基因啟動子區(qū)超甲基化在葡萄胎發(fā)生及惡變中的作用.pdf

1、目的：妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞疾?。╣estational trolahoblastic disease，GTD）是一組來源于胎盤絨毛滋養(yǎng)細(xì)胞的疾病，包括葡萄胎、侵蝕性葡萄胎、絨毛膜癌和胎盤部位滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤。這組疾病在亞洲的發(fā)病率是歐美等國的2到10倍，嚴(yán)重影響廣大婦女的生殖和健康。葡萄胎（Hydatidiform Mole）是妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞疾病的一種主要亞型，它是以絨毛水腫變性和胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞過度增殖為特征的一種病理變化，具有侵蝕性生長的特性，易發(fā)

2、生惡變而形成侵蝕性葡萄胎或絨癌。目前，葡萄胎發(fā)生及惡變機(jī)制尚不清楚，對其惡變的監(jiān)測主要依靠血HCG（human chorionic gonadotrophin，HCG）的變化及臨床癥狀、體征，除此之外尚無更好的預(yù)測其惡變的客觀指標(biāo)。P15、P16基因編碼的蛋白屬于細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子（CK I）家族，特異性抑制細(xì)胞周期蛋白D（CyclinD）與細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4/6（CDK4/CDK6）的結(jié)合，從而阻止細(xì)胞周期由G1期進(jìn)

3、入S期，呈現(xiàn)抑癌基因的作用。P15、P16基因在多種腫瘤發(fā)生中起重要作用，其失活機(jī)制主要是缺失、突變和啟動子區(qū)甲基化。腫瘤高甲基化-1（hypermethylatedin cancer-1，HIC-1）基因，是一個新的候選抑癌基因，位于17p13.3，編碼的蛋白質(zhì)具有五個Kruppel樣的乙炔鋅指結(jié)構(gòu)和氨基末端蛋白質(zhì)相互作用域BTB/POZ。野生型P53基因可以廣泛的調(diào)節(jié)HIC-1基因的轉(zhuǎn)錄過程。HIC-1基因作為一種重要的生長調(diào)節(jié)基因

4、，其缺失或失活與多種腫瘤的發(fā)生有密切關(guān)系。目前，關(guān)于P15、P16和HIC-1基因甲基化在葡萄胎中的作用的研究報道不多，因此通過對P15、P16和HIC-1基因啟動子區(qū)甲基化的研究將有助于進(jìn)一步了解葡萄胎發(fā)生和惡變的分子機(jī)制。本研究采用甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)（methylation specific PCR，MSP）檢測30例葡萄胎和20例正常妊娠絨毛組織中P15、P16和HIC-1基因啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài)，從而探討P15、P16和H

5、IC-1基因啟動子區(qū)的甲基化在葡萄胎發(fā)生及惡變過程中的作用。
　　 方法：選取葡萄胎標(biāo)本30例，來自河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院婦產(chǎn)科2005年1月至2008年5月收治的葡萄胎患者首次清宮后的葡萄樣組織，標(biāo)本經(jīng)10％中性甲醛固定。其中發(fā)生惡變的葡萄胎11例，未發(fā)生惡變的19例。以上標(biāo)本均由有經(jīng)驗的病理醫(yī)師診斷核實，具有完整的臨床病理資料。選取正常早孕妊娠絨毛標(biāo)本20例，來自同期于本院門診因早孕要求終止妊娠行人工流產(chǎn)術(shù)的患者，作為正常對照

6、，標(biāo)本經(jīng)95％乙醇固定。所有葡萄胎及正常絨毛標(biāo)本均經(jīng)酚-氯仿-異戊醇法提取基因組DNA，隨后用MSP法檢測30例葡萄胎組織和20例正常絨毛組織中P15、P16和HIC-1基因在啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài)。所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析系統(tǒng)，結(jié)果用連續(xù)校正的卡方或Fisher確切概率檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果：1.正常妊娠絨毛組織中未檢測到P16基因的甲基化，葡萄胎組織中P16基因的甲基化率為26.67

7、％，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，P16基因在葡萄胎組織中的甲基化率高于正常絨毛組織，有顯著差異（P<0.05）；發(fā)生惡變的葡萄胎中P16基因的甲基化率（54.55％）高于未發(fā)生惡變的葡萄胎中P16基因的甲基化率（10.53％），二者差異亦有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。2.正常妊娠絨毛組織和葡萄胎組織中均檢測到HIC-1基因高頻率的甲基化，基因的甲基化率分別為85.00％、90.00％，但經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，HIC-1基因在葡萄胎和正常絨毛組織中的甲基化率差

8、異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；發(fā)生惡變的葡萄胎中HIC-1基因的甲基化率（81.82％）低于未發(fā)生惡變的葡萄胎中HIC-1基因的甲基化率（94.74％），但二者差異亦無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。3.正常妊娠絨毛組織中未檢測到P15基因的甲基化，葡萄胎組織中P15基因的甲基化率僅為6.67％，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，P15基因在葡萄胎和正常絨毛組織中的甲基化率無顯著性差異（P>0.05）。
　　 結(jié)論：P16基因啟動子區(qū)甲基化可能在葡萄