5-HT在巨核系造血-前血小板形成及調(diào)控血小板生成素合成中的作用.pdf

1、目的:巨核系造血主要分為兩個(gè)過(guò)程:從造血干細(xì)胞到成熟巨核細(xì)胞的增殖和分化過(guò)程以及從成熟巨核細(xì)胞到前血小板前體形成，最終導(dǎo)致血小板釋放的過(guò)程。促血小板生成素(TPO)是調(diào)節(jié)巨核細(xì)胞的特異性生長(zhǎng)因子，骨髓間充質(zhì)細(xì)胞(MSCs)對(duì)巨核細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化也具有重要的作用。因此，對(duì)于巨核系造血的調(diào)控可以分為兩方面，一是直接作用于巨核細(xì)胞;二是參與調(diào)控骨髓間充質(zhì)TPO的生成，從而間接參與巨核系造血。有研究證實(shí)神經(jīng)遞質(zhì)5-HT能促進(jìn)巨核細(xì)胞和造血干細(xì)胞

2、增殖以及減少細(xì)胞凋亡。然而，其作用機(jī)制還不明確。血小板多種內(nèi)容物可以調(diào)節(jié)骨髓TPO合成，致密顆粒中的5-HT對(duì)其的作用尚不清楚。
　　方法:(1)采用Q-PCR，流式，Western Blot或免疫熒光四種方法檢測(cè)巨核細(xì)胞和MSCs上5-HT2受體mRNA或蛋白的表達(dá);(2)MTT或CCK-8檢測(cè)5-HT對(duì)巨核細(xì)胞和MSCs的增殖作用以及流式檢測(cè)凋亡及相關(guān)通路;(3)人類來(lái)源的骨髓細(xì)胞經(jīng)不同的刺激后進(jìn)行巨核細(xì)胞分類計(jì)數(shù);(4)建立

3、應(yīng)激創(chuàng)傷小鼠模型研究5-HT與TPO的關(guān)系;(5) Q-PCR和WB檢測(cè)MSCs TPO mRNA的表達(dá)和蛋白質(zhì)的合成。
　　結(jié)果:(1)多種方法可檢測(cè)到巨核細(xì)胞和MSCs表達(dá)5-HT2受體mRNA和蛋白;(2)5-HT呈劑量依賴性促進(jìn)巨核細(xì)胞和MSCs的生長(zhǎng)，以200 nM效果明顯;(3)200 nM5-HT處理后，巨核細(xì)胞Akt的磷酸化增多，AnnexinⅤ/PI，活性Caspase-3表達(dá)下降，含JC-1單體的細(xì)胞增多，作用

4、與TPO相似，但前者能被5-HT2受體抑制劑酮舍林阻斷，而后者不變;(4)5-HT處理組前血小板前體產(chǎn)生巨核細(xì)胞和產(chǎn)血小板巨核細(xì)胞的比例高于對(duì)照組，而凋亡巨核細(xì)胞的比例低于對(duì)照組。(5)創(chuàng)傷應(yīng)激小鼠血漿中5-HT升高早于TPO水平升高，加入5-HT合成抑制劑LX1606后，5-HT水平明顯下降，TPO水平也降低;(6)5-HT處理后，MSCs TPO mRNA表達(dá)高于對(duì)照組，加入5-HT2受體抑制劑后，TPOmRNA表達(dá)量下降，且低于正

5、常對(duì)照組。(7)200 nM5-HT處理后，MSCs中AKT，ERK和STAT3磷酸化水平升高，酮舍林則抑制該作用。
　　結(jié)論:5-HT能從兩方面調(diào)控巨核系造血:一是直接作用于巨核細(xì)胞，發(fā)揮促增殖和抗凋亡作用，并促進(jìn)巨核細(xì)胞成熟及促進(jìn)前血小板前體以及血小板的形成;二是作用于骨髓MSCs，促進(jìn)TPO的合成和分泌，間接促進(jìn)巨核系造血。5-HT可為體外擴(kuò)增巨核細(xì)胞和人工生成血小板提供新方案。同時(shí)，也為神經(jīng)系統(tǒng)可能通過(guò)神經(jīng)遞質(zhì)參與造血調(diào)控