5-HT在巨核系造血-前血小板形成及調(diào)控血小板生成素合成中的作用.pdf

1、目的:巨核系造血主要分為兩個過程:從造血干細胞到成熟巨核細胞的增殖和分化過程以及從成熟巨核細胞到前血小板前體形成，最終導致血小板釋放的過程。促血小板生成素(TPO)是調(diào)節(jié)巨核細胞的特異性生長因子，骨髓間充質(zhì)細胞(MSCs)對巨核細胞的生長和分化也具有重要的作用。因此，對于巨核系造血的調(diào)控可以分為兩方面，一是直接作用于巨核細胞;二是參與調(diào)控骨髓間充質(zhì)TPO的生成，從而間接參與巨核系造血。有研究證實神經(jīng)遞質(zhì)5-HT能促進巨核細胞和造血干細胞

2、增殖以及減少細胞凋亡。然而，其作用機制還不明確。血小板多種內(nèi)容物可以調(diào)節(jié)骨髓TPO合成，致密顆粒中的5-HT對其的作用尚不清楚。
　　方法:(1)采用Q-PCR，流式，Western Blot或免疫熒光四種方法檢測巨核細胞和MSCs上5-HT2受體mRNA或蛋白的表達;(2)MTT或CCK-8檢測5-HT對巨核細胞和MSCs的增殖作用以及流式檢測凋亡及相關(guān)通路;(3)人類來源的骨髓細胞經(jīng)不同的刺激后進行巨核細胞分類計數(shù);(4)建立

3、應激創(chuàng)傷小鼠模型研究5-HT與TPO的關(guān)系;(5) Q-PCR和WB檢測MSCs TPO mRNA的表達和蛋白質(zhì)的合成。
　　結(jié)果:(1)多種方法可檢測到巨核細胞和MSCs表達5-HT2受體mRNA和蛋白;(2)5-HT呈劑量依賴性促進巨核細胞和MSCs的生長，以200 nM效果明顯;(3)200 nM5-HT處理后，巨核細胞Akt的磷酸化增多，AnnexinⅤ/PI，活性Caspase-3表達下降，含JC-1單體的細胞增多，作用

4、與TPO相似，但前者能被5-HT2受體抑制劑酮舍林阻斷，而后者不變;(4)5-HT處理組前血小板前體產(chǎn)生巨核細胞和產(chǎn)血小板巨核細胞的比例高于對照組，而凋亡巨核細胞的比例低于對照組。(5)創(chuàng)傷應激小鼠血漿中5-HT升高早于TPO水平升高，加入5-HT合成抑制劑LX1606后，5-HT水平明顯下降，TPO水平也降低;(6)5-HT處理后，MSCs TPO mRNA表達高于對照組，加入5-HT2受體抑制劑后，TPOmRNA表達量下降，且低于正

5、常對照組。(7)200 nM5-HT處理后，MSCs中AKT，ERK和STAT3磷酸化水平升高，酮舍林則抑制該作用。
　　結(jié)論:5-HT能從兩方面調(diào)控巨核系造血:一是直接作用于巨核細胞，發(fā)揮促增殖和抗凋亡作用，并促進巨核細胞成熟及促進前血小板前體以及血小板的形成;二是作用于骨髓MSCs，促進TPO的合成和分泌，間接促進巨核系造血。5-HT可為體外擴增巨核細胞和人工生成血小板提供新方案。同時，也為神經(jīng)系統(tǒng)可能通過神經(jīng)遞質(zhì)參與造血調(diào)控