甜菊醇糖苷生物合成途徑關(guān)鍵基因的功能評價.pdf

1、甜葉菊(Stevia rebaudiana Bertoni)生產(chǎn)的甜菊醇糖苷因其具有高甜度、低熱能、不參與人體內(nèi)代謝兼具保健功能等特點，被譽為最有發(fā)展前途的新糖源，具有廣泛的應用前景和很高的經(jīng)濟價值。本文利用現(xiàn)代分子生物學方法，系統(tǒng)研究了甜菊醇糖苷在甜葉菊細胞中的生化合成途徑以及催化各步反應的酶和編碼基因的功能，完善了甜菊醇糖苷生物合成途徑，并嘗試了利用甜菊醇糖苷生物合成途徑中的關(guān)鍵基因進行人為的表達調(diào)控，改變其生物合成，為培育具有高產(chǎn)

2、量、高品質(zhì)的，特別是適合寧夏地區(qū)栽培的甜葉菊品種提供理論依據(jù)和技術(shù)方法。
　　研究結(jié)果如下:
　　1.首次分離克隆了甜菊醇糖苷生物合成途徑中的一個未確定的關(guān)鍵基因。即甜菊醇C-13位上發(fā)生糖基化連接第一個葡糖基后，再次連接第二個葡糖基的UDP葡糖基轉(zhuǎn)移酶(UGTs)的基因SrUGT91D2m。該轉(zhuǎn)移酶催化甜菊醇單糖苷生成甜菊醇雙糖苷。本實驗獲得了SrUG T91D2m基因的全長序列，并分析了其生物信息學特征。
　　2.

3、構(gòu)建了甜菊醇糖苷生物合成途徑中關(guān)鍵基因的表達載體。通過PCR擴增、酶切和連接等方法，將甜菊醇糖苷生物合成途徑的關(guān)鍵基因SrUGT76G1、SrUGT86C2和SrUGT91D2m全長以單獨或組合的形式，分別構(gòu)建到植物基因二元表達載體pKAFCR100，并轉(zhuǎn)化到農(nóng)桿菌菌株EHA105，為甜葉菊轉(zhuǎn)基因操作和基因功能分析做好了準備。
　　3.建立了農(nóng)桿菌介導的甜葉菊基因轉(zhuǎn)化體系。以甜葉菊葉片為外植體，對影響基因轉(zhuǎn)化效果的農(nóng)桿菌菌株、感染