生防芽孢桿菌的篩選及其抗菌物質(zhì)的分離純化與鑒定.pdf

1、農(nóng)作物病害是一個全球性的難題，它給人類帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。農(nóng)作物病害主要是由真菌引起的。農(nóng)作物病害的生物防治是利用有益微生物或微生物代謝產(chǎn)物對農(nóng)作物病害進(jìn)行有效防治的技術(shù)與方法。芽孢桿菌的諸多優(yōu)勢如高抗逆、分布廣、生長快等特點在生物防治中受到越來越多的關(guān)注。
　　本實驗從篩選芽孢桿菌的目的出發(fā)，從黑龍江省涼水國家級自然保護(hù)區(qū)林下土壤中篩選芽孢桿菌，經(jīng)過反復(fù)純化，得到幾十株芽孢桿菌。以植物病原真菌為靶標(biāo)菌株，對所篩選得到的芽孢桿菌

2、初篩和復(fù)篩，最終挑選出3株抑菌活性強(qiáng)的生防芽孢桿菌并保藏。
　　從形態(tài)學(xué)鑒定、生理生化鑒定，菌株16SrDNA序列的測定三個方面對所篩選得到3株生防芽孢桿菌進(jìn)行了鑒定，經(jīng)鑒定，拮抗芽孢桿菌F1、F17和H1分別是短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)、多粘類芽孢桿菌(Paenibacillus polymyxa)和枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)。
　　對所篩選得到的拮抗菌株的拮抗機(jī)理進(jìn)行了初步研

3、究，發(fā)現(xiàn)所篩選出的拮抗芽孢桿菌F1、F17和H1的發(fā)酵代謝產(chǎn)物對植物病原菌都有明顯抑制作用，可以初步判定篩到的拮抗芽孢桿菌F1、F17和H1都是通過發(fā)酵液中胞外分泌物對植物病原菌起到的抑菌作用，且同種拮抗芽孢桿菌對不同的植物病原菌有明顯不同的抑制效果。且經(jīng)過高溫處理后，拮抗芽孢桿菌菌株F1、H1的發(fā)酵液仍然具有很明顯的抑菌活性，而拮抗芽孢桿菌菌株F17經(jīng)高溫處理后，其無菌發(fā)酵液里的抗菌物質(zhì)失活。
　　利用飽和度為60％的硫酸銨沉淀

4、短小芽孢桿菌F1的無菌發(fā)酵液，得到粗蛋白，然后經(jīng)DEAE-Sepharose陰離子交換層析后，用不同濃度梯度的NaCl洗脫，其中用0.35mol/L NaCl洗脫的組分具有抑菌活性。將具有抑菌活性的蛋白進(jìn)行通過SDS-PAGE進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)該抑菌蛋白的分子量約為36.0kDa。將得到的抗菌蛋白進(jìn)行121℃處理30min后，發(fā)現(xiàn)該蛋白仍然具有明顯的抑菌活性。
　　本文篩選得到了具有抑菌作用的芽孢桿菌，并初步分離純化得到抗菌蛋白，為今