枯草芽孢桿菌G8抗菌物質(zhì)的理化性質(zhì)分析及分離純化.pdf

1、本論文以黃瓜菌核病菌為指示菌測定枯草芽孢桿菌G8菌株代謝產(chǎn)物抗菌蛋白的抗菌活性、作用特性及盆栽和田間防病作用,并對抗菌蛋白進(jìn)行分離純化和特性分析,從而為進(jìn)一步生防應(yīng)用打下基礎(chǔ)。 平板對峙法測得G8菌株和平板打孔法測得其發(fā)酵代謝產(chǎn)物均具廣譜抗菌活性。對黃瓜菌核病菌Sclerotinia sclerotiorum、棉花枯萎病菌Fusariumoxysporum fsp.vesinfectum、黃瓜蔓枯病菌Ascochyta citr

2、ullina Smith、棉花立枯病菌Rhizoctonia solani、煙草黑脛病菌Phytophthora parasiticavat. nicotianae、棉花紅腐病菌Fusarium moniliforme var. intermedium、棉花黑斑病菌Xanthomonas campestris pv.Malvacearum、番茄葉霉病菌Cladosporium flulvum、小麥紋枯病菌Rhizoctonia cere

3、alis、棉花炭疽病菌Colletotrichum gossypii Southw、黃瓜腐霉病菌Pythium aphanidermatum、西洋參疫病菌Phytophthora cactorum、大蒜灰霉病菌Botrytis cinerea和番茄早疫病菌Alternaria solani Soraue均具有拮抗活性。 溫室防病試驗(yàn)結(jié)果表明拮抗菌G8發(fā)酵液200mL/L稀釋液控制黃瓜菌核病的保護(hù)效果為66.67％,治療效果為60

4、.87％,均低于化學(xué)藥劑。土壤處理試驗(yàn)表明在土壤中接種病原菌后36h后再接種拮抗菌,G8發(fā)酵液對黃瓜菌核病有很好的治療作用,噴施拮抗菌液過早或過晚則影響防效。說明G8發(fā)酵液不適于直接進(jìn)行生物防治,需對其抗菌物質(zhì)進(jìn)行研究。 枯草芽孢桿菌G8無菌發(fā)酵液經(jīng)40％硫酸銨飽和度沉淀得抗菌蛋白。抗菌蛋白抑菌譜廣,對供試病原真菌棉花紅腐病菌Fusarium moniliformevar.intermedium抑制率在60％～80％之間；對黃瓜

5、蔓枯病菌Ascochytacitrullina Smith、黃瓜菌核病菌Sclerotinia sclerotiorum、番茄葉霉病菌Cladosporium flulvum、番茄早疫病菌Alternarid solani Soraue、棉花炭疽病菌Colletotrichum gossypii Southw和西洋參疫病菌Phytophthoracactorum的抑菌率在80％以上。 為確定其發(fā)酵液代謝產(chǎn)物抗菌蛋白產(chǎn)生的最佳培養(yǎng)

6、基和培養(yǎng)條件,用40％硫酸銨沉淀法從無菌發(fā)酵液中提取抗菌蛋白并測定其對黃瓜菌核病菌Sclerotinia sclerotiorum的拮抗活性。結(jié)果表明G8產(chǎn)生抗菌蛋白的最佳培養(yǎng)基為LB培養(yǎng)基,最佳發(fā)酵pH值、溫度、接種量、培養(yǎng)時(shí)間和搖床轉(zhuǎn)速分別為pH7.0、37℃、30％、36h和180r/m。在此發(fā)酵條件下,菌體生長量與抑菌蛋白的產(chǎn)量均達(dá)到最大且菌體生長量與抗菌蛋白的產(chǎn)生量呈正相關(guān)?？咕鞍椎奶匦苑治鋈缦拢翰糠帜退?將其pH值調(diào)為1.

7、0作用16h后對黃瓜菌核病菌的抑制率為69.2％；耐高溫,抗菌蛋白經(jīng)100℃處理60min保持原有活性的80.8％,80℃對抗菌蛋白結(jié)構(gòu)無破壞作用；部分耐有機(jī)溶劑和紫外線?？咕鞍卓稍诔貤l件下長期儲存而不失活。 顯微觀察結(jié)果表明抗菌蛋白可使黃瓜菌核病菌Sclerotiniasclerotiorum菌絲消融、原生質(zhì)滲漏、菌絲細(xì)胞泡囊化、分叉增多。此外抗菌蛋白還能夠抑制黃瓜菌核病菌Sclerotinia sclerotiorum菌