枯草芽孢桿菌產(chǎn)β-甘露聚糖酶的發(fā)酵優(yōu)化、純化及性質(zhì)的研究.pdf

1、β-甘露聚糖酶是一種能夠水解半纖維素的內(nèi)切酶,其作用底物主要為由β-1,4-D-甘露糖苷鍵連接而成的甘露聚糖等多糖。近年來,隨著對β-甘露聚糖酶的研究不斷深入,其在多種領(lǐng)域均得到廣泛關(guān)注,包括在飼料、食品、造紙、生物脫膠、石油壓裂以及分子生物學(xué)等方面的應(yīng)用前景也愈加光明。
　　 本試驗考查了不同發(fā)酵條件對菌體產(chǎn)酶的影響,進一步對所產(chǎn)甘露聚糖粗酶進行分離純化,并初步研究了純酶的酶學(xué)性質(zhì),所得結(jié)果如下:
　　 (1)對實驗室

2、現(xiàn)有系列枯草芽孢桿菌資源進行選育,采用剛果紅染色初篩法和DNS測酶活力復(fù)篩法,篩選出β-甘露聚糖酶的高產(chǎn)菌株枯草芽孢桿菌DY-14。
　　 (2)對篩選得到的枯草芽抱桿菌DY-14進行發(fā)酵條件優(yōu)化。經(jīng)單因素及正交實驗后,得到該菌株產(chǎn)β-甘露聚糖酶的最優(yōu)組合條件:魔芋粉發(fā)酵培養(yǎng)基(魔芋粉3％、蛋白胨1.5％),初始pH值8.0,搖瓶裝液量10mL/100mL,接種量1％,37℃發(fā)酵24h,最終產(chǎn)生的β-甘露聚糖酶活力為3216 U

3、/mL,是優(yōu)化前(977.2U/mL)的3.29倍。
　　 (3)通過DEAE-Sepharose FF離子交換層析和Sephadex G-75凝膠過濾等純化技術(shù)對枯草芽孢桿菌DY-14胞外β-甘露聚糖酶進行了純化,得到的純酶最終純化倍數(shù)達(dá)15.6倍,回收率為20.98％。
　　 (4)研究枯草芽孢桿菌DY-14所產(chǎn)β-甘露聚糖的酶學(xué)性質(zhì)發(fā)現(xiàn),該酶的最適反應(yīng)pH值為6,pH在6～7.5的范圍內(nèi)穩(wěn)定性較好,可保持80％以上