β-甘露聚糖酶發(fā)酵條件的優(yōu)化、酶的純化和性質(zhì)研究.pdf

1、隨著新型資源半纖維素日益受重視和甘露寡糖醫(yī)用營養(yǎng)價值的發(fā)現(xiàn)，加上β-甘露聚糖酶在各個領(lǐng)域的潛在應(yīng)用價值，有關(guān)β-甘露聚糖酶的相應(yīng)研究逐步開展，并取得了一定的成果。本文首先優(yōu)化了東北林業(yè)大學(xué)微生物實(shí)驗(yàn)室保存的工程菌株畢赤酵母(PichiaPastoris) Man12-17的發(fā)酵β-甘露聚糖酶條件，然后對最佳產(chǎn)酶條件下的發(fā)酵液進(jìn)行純化并研究了其酶學(xué)特性。獲得如下成果:
　　(1)通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交試驗(yàn)相結(jié)合，獲得最佳產(chǎn)酶條件:發(fā)酵

2、溫度29℃，底物濃度0.01％，初始發(fā)酵液pH6.00，發(fā)酵時間4d，甲醇濃度0.5％，接種量OD600值為1.0。優(yōu)化前酶活力為3797.29U/mL，優(yōu)化后酶活力為5009.4U/mL，提高了31.93％。
　　(2)在最佳產(chǎn)酶條件下獲得的發(fā)酵液為初始材料，通過硫酸銨分級沉淀、透析、DEAE-Sepharose Fast Flow陰離子交換層析、G75葡聚糖凝膠等一系列步驟，獲得了只有單一目的條帶的電泳純酶蛋白組分。純化后的酶

3、比活力為8341.14U/mg，回收率為61.68％，純化倍數(shù)高達(dá)743.42。在同類研究中，處于領(lǐng)先水平。
　　(3)研究確定了該酶的最適反應(yīng)溫度為60℃，最適反應(yīng)pH為6.30，選擇磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉緩沖液。在pH6.30-pH7.10的弱酸條件下和65℃以下，酶穩(wěn)定性良好。不同金屬離子、EDTA、SDS、有機(jī)試劑和不同濃度的NaCl均對酶活性產(chǎn)生不同程度的影響。根據(jù)Lineweaver-Burk雙倒數(shù)作圖法和公式1/V=