β-甘露聚糖酶高產(chǎn)菌株選育及其酶的純化研究.pdf

1、本研究以四川南充魔芋基地的土壤樣品為實驗材料,通過富集培養(yǎng)和分離純化,篩選出80株產(chǎn)β-甘露聚糖酶的菌株。采用剛果紅透明圈法進行初篩,得到10株酶活較高的菌株。將篩得的菌株搖瓶發(fā)酵后,用DNS法測定粗酶液酶活,選出一株酶活最高的菌株,其編號為MM5,酶活達到1594 U/mL。通過形態(tài)觀察、生理生化試驗及16SrDNA序列分析鑒定該菌為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)。
　　 以MM5為出發(fā)菌株,通過連續(xù)兩次紫

2、外誘變得到誘變菌株LD24H4,酶活提高到3717 U/mL。通過單因素試驗和正交試驗確定了菌株LD24H4產(chǎn)酶的最佳培養(yǎng)基組分(g/L):魔芋粉20.0,干酪素2.5,NaCl1.0,MgSO40.5,KH2PO40.5,pH7.5。最適產(chǎn)酶培養(yǎng)條件:47℃,裝液量90 mL(250 mL三角瓶),接種量1％,轉(zhuǎn)速200 r/min。在此條件下發(fā)酵26 h,β-甘露聚糖酶活為12534 U/mL,達到優(yōu)化前的3.37倍。
　　

3、 采用硫酸銨鹽析、DEAE-sepharose FF離子交換層析和Sephadex G-75凝膠過濾的純化技術(shù),對枯草芽孢桿菌LD24H4所產(chǎn)U/mL甘露聚糖酶進行純化,所得酶液在SDS-PAGE電泳圖譜中呈單一蛋白質(zhì)區(qū)帶。經(jīng)計算該酶分子量為32 kDa,最終回收率2.9％,純化倍數(shù)3.47。
　　 對菌株LD24H4所產(chǎn)U/mL甘露聚糖酶的酶學(xué)性質(zhì)進行初步研究。結(jié)果表明,酶的最適反應(yīng)溫度為50℃,40℃下酶活穩(wěn)定；最適pH值為