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文檔簡介
1、目的:心力衰竭時(shí),交感神經(jīng)是通過兒茶酚胺作用于心肌細(xì)胞膜上的腎上腺素受體(AR),而β-AR在介導(dǎo)心臟功能中占主導(dǎo)地位。導(dǎo)致心衰的許多疾病中,心肌細(xì)胞β-AR發(fā)生了變化,主要表現(xiàn)為β<,1>-AR密度下調(diào),而β<,2>-AR密度改變不明顯,致使β<,1>/β<,2>-AR比例改變,從而使心肌收縮反應(yīng)性下降,并影響心肌儲備。研究發(fā)現(xiàn),在心衰和老化的心臟上,β<,1>-AR誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡而β<,2>-AR對心肌細(xì)胞的凋亡有抑制作用,因此,
2、本實(shí)驗(yàn)旨在利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將β<,1>-、β<,2>-AR基因?qū)胄乃バ募〖?xì)胞,增加β<,1>-、β<,2>-AR表達(dá),觀察是否可改善心衰心肌細(xì)胞的收縮功能,為心衰的治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法:動物隨機(jī)分對照組和心衰組,用異丙腎上腺素制作大鼠心衰模型,測血液動力學(xué)。分離培養(yǎng)心衰和正常成年大鼠心肌細(xì)胞,心肌細(xì)胞分為4組:正常對照組、心衰組、β<,1>轉(zhuǎn)染+心衰組、β<,2>轉(zhuǎn)染+心衰組。每組按給藥不同又各自分為:正常對照組分為:空白對
3、照組(Control,心肌細(xì)胞不做任何處理)、β<,1>受體選擇性阻斷劑CGP20712A(CGP)、β<,2>受體選擇性阻斷劑ICI118551組(ICI組);心衰組分為:心衰組(F組)、心衰+ICI組、心衰+CGP組、GFP+心衰組;β<,1>轉(zhuǎn)染+心衰組分為:β<,1>轉(zhuǎn)染+心衰組、β<,1>轉(zhuǎn)染+心衰+CGP組;β<,2>轉(zhuǎn)染+心衰組分為:β<,2>轉(zhuǎn)染+心衰組、β<,2>轉(zhuǎn)染+心衰+ICI組。各組均于培養(yǎng)24h后,作下述指標(biāo)的
4、測定:用Western blot測β<,1>或β<,2>-AR蛋白表達(dá)量;不加入或分別加入ICI118551或CGP20712A孵育1-2 h后做單個心肌細(xì)胞收縮功能的測定。數(shù)據(jù)以X±S表示,統(tǒng)計(jì)分析采用單因素方差分析(ANOVA),成組設(shè)計(jì)的兩組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)。 結(jié)果 1.血流動力學(xué)指標(biāo):與正常組的大鼠比較,心衰組的大鼠平均動脈壓(MAP),收縮壓(SP)升高,舒張壓(DP)升高,左心室內(nèi)壓變化速率(±dp/dt
5、)改變,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01或P<0.05)。 2.Western blot結(jié)果:攜帶人β<,1>-AR基因的腺病毒感染心衰大鼠心肌細(xì)胞后β<,1>-AR蛋白表達(dá)明顯增高(P<0.01);攜帶人β<,2>-AR基因的腺病毒感染心衰大鼠心肌細(xì)胞后β<,2>-AR蛋白表達(dá)明顯增高(P<0.01)。結(jié)果提示β<,1>-、p<,2>-AR蛋白在心衰大鼠心肌細(xì)胞上大量表達(dá)。 3.增加β<,1>-、β<,2>-AR表達(dá)對心
6、衰心肌細(xì)胞存活率的影響:F組心肌細(xì)胞存活率明顯降低(P<0.01);β<,1>轉(zhuǎn)染+F組心肌細(xì)胞存活率比F組更低(P<0.01),β<,2>轉(zhuǎn)染+F組心肌細(xì)胞存活率比F組升高(P<0.05)。結(jié)果提示β<,1>基因的轉(zhuǎn)染可能加重心衰心肌細(xì)胞的損傷作用,β<,2>基因的轉(zhuǎn)染對心衰心肌細(xì)胞有保護(hù)作用。 4.單個心肌細(xì)胞收縮功能的結(jié)果:正常對照組:ICI組收縮幅度與Control組比無明顯降低(P>0.05);CGP組收縮幅度與Con
7、trol組明顯降低(P<0.01)。結(jié)果提示正常大鼠心肌細(xì)胞的收縮主要由β<,1>-AR介導(dǎo),β<,2>-AR作用較弱。心衰組:F組收縮幅度與Control組明顯降低(P<0.01):F+ICI組比ICI組明顯降低,與F組比無明顯降低(P>0.05);F+CGP組比CGP組明顯降低(P<0.01),與F組比明顯降低(P<0.01),GFP+F組收縮幅度與F組無明顯差異(P>0.05)。結(jié)果提示:心衰心肌細(xì)胞收縮功能降低,以腺病毒為載體的
8、綠色熒光蛋白對心衰心肌細(xì)胞無明顯影響。β<,1>轉(zhuǎn)染+心衰組:轉(zhuǎn)染人β<,1>-AR基因的心衰心肌細(xì)胞培養(yǎng)24h后,心衰心肌細(xì)胞收縮幅度明顯增強(qiáng)(P<0.01)。提示增加β<,1>-AR基因表達(dá)對心衰大鼠心肌細(xì)胞收縮功能有增強(qiáng)作用。β<,2>轉(zhuǎn)染+心衰組:轉(zhuǎn)染人β<,2>-AR基因的心衰心肌細(xì)胞培養(yǎng)24h后,心衰心肌細(xì)胞收縮幅度明顯增強(qiáng)(P<0.01)。提示增加β<,2>-AR基因表達(dá)能增強(qiáng)心衰大鼠心肌細(xì)胞的收縮功能。 結(jié)論:
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