P物質(zhì)預(yù)先給藥對去甲腎上腺素誘導(dǎo)培養(yǎng)大鼠心肌細胞β-,1--受體表達的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的：觀察P物質(zhì)(Substance P.SP)與去甲腎上腺素(Norepinephrine,NE)單獨作用對心肌細胞β1-受體(β1-R)表達的影響，以及SP預(yù)先給藥對NE誘導(dǎo)的心肌細胞β1-R表達的影響。 方法：(1)心肌細胞的培養(yǎng)及鑒定。實驗選用1-3 d齡的Sprague-Dawley(SD)大鼠建立新生大鼠心肌細胞體外培養(yǎng)模型，采用免疫細胞化學(xué)(IC)染色方法對心肌細胞進行鑒定。 (2)觀察不同濃度NE的作用。

2、取15孔培養(yǎng)72 h的心肌細胞隨機分為對照組(不加藥物干預(yù))與NE組[分別給予NE(終濃度分別為10-9mol·L-1、10-8mol·L-1、10-7mol·L-1和10-6mol·L-1)干預(yù)]，n=3。細胞培養(yǎng)基內(nèi)分別加入NE共培3h后，采用IC染色方法測定心肌細胞內(nèi)β1-R表達的變化。另外再取15孔培養(yǎng)的心肌細胞，分組與藥物干預(yù)均同上，采用流式細胞術(shù)(FCM)測定心肌細胞β1-R的表達變化。 (3)觀察不同濃度SP的作用

3、。實驗選用6孔培養(yǎng)72h的心肌細胞隨機分為2組(n=3)：正常對照組(不加藥物干預(yù))與實驗組(給予終濃度為10-7mol·L-1SP干預(yù))。SP作用3h后，采用IC染色方法測定心肌細胞內(nèi)β1-R表達的變化。另外再取15孔培養(yǎng)的心肌細胞，隨機分為對照組(不加藥物干預(yù))與SP組(分別給予10-9、10-8、10-7、10-6mol·L-1SP干預(yù))，n=3。細胞培養(yǎng)基內(nèi)分別加入SP共培3 h后，采用FCM測定心肌細胞β1-R表達的變化。

4、 (4)觀察SP預(yù)先給藥對NE作用的影響。實驗選用12孔培養(yǎng)72h的心肌細胞隨機分為4組(n=3)：對照組(不加藥物干預(yù))、10-7mol·L-1NE組、10-6mol·L-1SP+10-7mol·L-1NE組(給予SP 30 min后再加入NE)、NK-1受體拮抗劑(S3144)+10-6mol·L-1 SP+10-7mol·L-1NE組(給予S3144 30 min后加入SP，再培養(yǎng)30 min后加入NE)，n=3。采用FCM測

5、定心肌細胞β1-R的表達變化。 結(jié)果：(1)成功建立大鼠心肌細胞體外培養(yǎng)模型。 (2)IC與FCM結(jié)果均顯示，與對照組比較，10-9、10-8、10-7、10-6mol·L-1NE組β1-R表達均上調(diào)，兩種方法中，10-8mol·L-1。(IC)與10-7mol·L-1(FCM)NE組β1-R表達上調(diào)最明顯。 (3)IC結(jié)果顯示，SP組β1-R表達低于對照組(P<0.05)。FCM結(jié)果顯示，10-9、10-8、1

6、0-7、10-6mol·L-1SP組β1-R表達均低于對照組，除10-9mol·L-1SP組外，其余各組與對照組間的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P<0.05)。 (4)與對照組比較，NE組β1-R表達上調(diào)(p<0.05)，SP+NE組β1-R表達無明顯變化(p>0.05)，S3144+SP+NE組β1-R表達上調(diào)但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。 結(jié)論：(1)NE可誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的大鼠心肌細胞β1-R表達上調(diào)。 (2)